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更换进口的成品试剂盒,基本上得率都还可以
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按照说明书加较大量的细胞,充分溶解细胞,洗脱的时候,减少洗脱液的体积到能盖过离心柱的硅胶面就可以。增加洗脱次数。
天一湖医者
洗脱时可以将洗脱液于65~70℃水浴预热,加入洗脱液后在室温静置2~5分钟,可提高洗脱效率,加大DNA 产量。
未来9
得率低的原因及解决办法
1 ) 样品材料老化或者反复冻融导致 DNA 含量下降: 应选择新鲜的材料样品,如新鲜血液、新鲜菌液、刚离体的动物组织或幼嫩的植物组织等,不能立即处理的样品应放入液氮或-70℃低温保存,以免DNA降解。
2 ) 样品破壁或者裂解不完全, DNA 未充分释放: 动植物样品应在液氮中充分研磨,G+细菌、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械方法协助破壁。
3 ) 样品过多导致细胞裂解不充分: 加样过多导致细胞裂解不充分,细胞裂解不充分。
4 ) DNA 吸附不均匀: 如,在上吸附柱前没有加无水乙醇,或使用低浓度乙醇代替无水乙醇,会导致DNA不能充分沉淀,与硅胶模吸附不彻底,因此应在样品裂解后加适量的无水乙醇,再上吸附柱使DNA与硅胶模充分吸附。
5 ) DNA 洗脱不适当: 洗脱缓冲液pH过低会阻碍DNA从硅胶模上洗脱下来,应确保洗脱液pH值在7.0~8.5之间。洗脱液体积过少(<30μL),不易浸透硅胶模,使DNA不能洗脱下来,因此,洗脱液体积应大于30μL,超过200μL,所得的DNA 浓度降低。洗脱时可以将洗脱液于65~70℃水浴预热,加入洗脱液后在室温静置2~5分钟,可提高洗脱效率,加大DNA 产量。
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