求大神指点HOK细胞怎么培养

HOK细胞是帖壁细胞，用89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗养就可以。但是细胞对消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3、用适量的冻存液重悬细胞，并放置于冻存管中；

4、先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃。

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

收到复苏好的HOK细胞的处理方法： 1. 先从外包装盒拿出细胞瓶，在细胞瓶表面喷一层酒精，并小心去掉封口膜； 2. 在显微镜下观察细胞状态，并确定是否染菌，如有染菌，请立即拍照，并将细胞丢掉； 3. 将培养瓶置于 37°C，5% CO2 的无菌培养箱中培养 4-6 小时； 4. 倒掉多余的培养基，留正常体积的培养基； 5. 重新将培养瓶置于 37°C，5% CO2 的无菌培养箱中培养过夜 6. 第二天传代。

收到冻存HOK细胞的处理方法： 1.37°C 水浴预热培养基； 2.从液氮中取出细胞迅速放入37°C 水浴快速解冻（解冻后不要继续暖细胞）； 3.在超净台中加入5ml 培养基重悬细胞，1000rpm 离心5min； 4.弃上清，加入5ml 培养基重悬细胞后转入 T25培养瓶中，轻轻晃匀； 5.置于37°C，5% CO2培养箱中培养(培养瓶盖没有透气孔的话，瓶盖不要拧太紧)； 6.第二天，用新鲜的培养基给细胞换液后继续培养。