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你是不是裂解细胞的时间长了,把genomic dna一起裂开了?建议优化一下裂解时间。
天一湖医者
选取的材料不新鲜或反复冻融,采集材料后未及时处理或未低温保存:陈旧血液或不新鲜的材料中,细胞凋亡导致DNA降解,或者低温保存的样品经反复冻融导致细胞破碎,内源性核酸酶降解DNA,因此应该选用新鲜的材料样品,不能及时处理则低温保存,运输过程中应该使用干冰:
1 ) 未能有效的抑制内源性核酸酶的作用:
某些DNase含量丰富的动植物组织样品应在液氮中研磨或匀浆,研磨过称中随时补充液氮,并在样品未完全解冻之前加入含有抑制核酸酶作用的裂解液。
2 ) 操作过于剧烈导致 DNA 被机械打断:
预处理的样品应该加入细胞裂解以后,所有操作应该尽量柔和,避免剧烈振荡。
未来9
降解无怪乎几种原因:
1,加入提取液后,若是65度提取,时间太久,有可能造成部分降解。
2,降入氯仿/异戊醇后,剧烈混匀时间太久,造成部分DNA断裂
3,打碎组织时最好用液氮处理后研磨的方式,用珠子打碎在后期混匀过程中也容易造成DNA断裂
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