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如何才能提高质粒提取的浓度?用的omega试剂盒。每次提取浓度就在100ng/ul左右,用于转染根本不够用,一下就用完。

相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

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Guoood

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4 个回答

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迟C迟

有帮助

试剂盒已经很不错了,要是提不出浓度很高的质粒,可以试试下面的一些方法:
1、增加收菌次数,相对提高了质粒的量,这样的话裂解液的量可以适当增加;
2、裂解要充分,变性和复性按说明应该是不超过5分钟,合理控制时间,一般在3分到4分半的时间都是可以的;
3、过柱子时,吸附的时间尽量长一些,可以在这期间做做其他实验或者吃个饭什么的;
4、如果没有必要,不使用去蛋白液,因为每过一遍柱子,其损耗越大,不过这得根据说明的菌种而定;
4、最后洗脱回收的时候,要单方面提高浓度,就要适当减少洗脱液的量,我一般都是回收到40~50 μL的,同时要增加洗脱次数,一般两三次足矣.
如果以上方法都用遍了还无效,就应该考虑菌种本身的问题,是不是冻融或者传代次数过高,导致质粒本身丢失?质粒本身在大肠杆菌的拷贝数是多少?不行的话建议重新将质粒导入到大肠杆菌感受态细胞中。

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bamboopiggy

有帮助

1.提高菌的浓度 ,2要有足够的裂解时间,但是又不能裂解过了。3减少洗脱的液体量,使其能覆盖离心柱的底面的硅胶片就好。4增加洗脱次数。

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天一湖医者

有帮助

1、提高菌液浓度;2、如果是乳酸菌质粒可以优化溶菌酶的添加量,破壁完全;3、可以将多个管中的溶液添加到同一个柱子中;4、洗脱时采用温水,静止一会再离心;5、洗脱的溶液体积变小一些,加大浓缩力度

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未来9

有帮助

提质粒的时候菌体密度稍微高些,裂解液,中和液用量可适当增加。中和后吸取上清的时候千万不要吸到白色沉淀。
或者采用中抽试剂盒,可以抽提上百毫升的菌液。

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