大鼠原代施万细胞分离培养如何进行？
PassengerNN7N
选用1周龄SD大鼠，取坐骨神经分离神经外膜后，胰酶和一型胶原酶消化30~40分钟，铺板后镜下可见单个细胞。然后细胞一直不怎么贴壁，后来细胞还会聚拢形成悬浮团块，在第4、5天可能有少量贴壁，最后也无法长起来。请问各位前辈有遇到过相似问题的嘛？文献中描述一般第二天就大量贴壁了…我也试过组织块法第3天能有细胞爬出，很像别人图片里的施万细胞，但是最后也没长起来。请问酶消化法贴壁时间在多少天都正常？还有生长因子必须要用吗？那和阿糖胞苷使用时间如何错开呢？
3 个回答
天雨心晴
一般都是用差速贴壁法进行分离培养。
Eason老歌迷
目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法，即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异，去除成纤维等污染细胞，以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液，置于未覆层的培养皿中，37℃,5%CO2孵箱中培养30min后，将未贴壁的细胞悬液转种于另－未包被的器皿中，30min后重复以上操作，最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中。37℃,5%CO2继续培养5-10d。培养至7d,典型的施万细胞形态呈小卵圆形或纺锤形胞体，立体感强，伸出双极、三极长而纤细的突起彼此交织成网络。随着培养时间的延长，较长的突起平行排列成束状，胞体“肩并肩” 生长，一致性很好。成年鼠的施万细胞体外培养较为困难，其生长对Laminin基质有绝对依赖性，而新生鼠则在多聚赖氨酸覆层上就能很好地生长。
天一湖医者
看下培养液颜色，是不是要更换培养液了，做下活性检测，看是不是有污染，细胞是不是死了。细胞和人一样，环境不舒服的时候就会表现出来的，养细胞是个细心活，慢慢来。一般消化时间约为1至3分钟，影响消化速度的因素较多，主要有胰酶溶液的活性（配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等）、消化时的温度（气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度）以及所加胰酶溶液的多少等 ，加入胰蛋白酶-EDTA溶液，视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多（依培养器皿的大小而定），以使充分浸润；
