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大鼠原代施万细胞分离培养如何进行?

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PassengerNN7N

选用1周龄SD大鼠,取坐骨神经分离神经外膜后,胰酶和一型胶原酶消化30~40分钟,铺板后镜下可见单个细胞。然后细胞一直不怎么贴壁,后来细胞还会聚拢形成悬浮团块,在第4、5天可能有少量贴壁,最后也无法长起来。请问各位前辈有遇到过相似问题的嘛?文献中描述一般第二天就大量贴壁了…我也试过组织块法第3天能有细胞爬出,很像别人图片里的施万细胞,但是最后也没长起来。请问酶消化法贴壁时间在多少天都正常?还有生长因子必须要用吗?那和阿糖胞苷使用时间如何错开呢?

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3 个回答

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天雨心晴

有帮助

一般都是用差速贴壁法进行分离培养。

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Eason老歌迷

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目前最简便、快捷分离纯化施万细胞的方法是差速贴壁法,即根据不同细胞在培养器皿上贴壁速度的差异,去除成纤维等污染细胞,以获得高纯度施万细胞。细胞经0.125%胰蛋白酶消化后,制成单细胞悬液,置于未覆层的培养皿中,37℃,5%CO2孵箱中培养30min后,将未贴壁的细胞悬液转种于另-未包被的器皿中,30min后重复以上操作,最后将未贴壁细胞按照合适的密度接种在多聚赖氨酸或Laminin包被的培养器皿中。37℃,5%CO2继续培养5-10d。培养至7d,典型的施万细胞形态呈小卵圆形或纺锤形胞体,立体感强,伸出双极、三极长而纤细的突起彼此交织成网络。随着培养时间的延长,较长的突起平行排列成束状,胞体“肩并肩” 生长,一致性很好。成年鼠的施万细胞体外培养较为困难,其生长对Laminin基质有绝对依赖性,而新生鼠则在多聚赖氨酸覆层上就能很好地生长。

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天一湖医者

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看下培养液颜色,是不是要更换培养液了,做下活性检测,看是不是有污染,细胞是不是死了。细胞和人一样,环境不舒服的时候就会表现出来的,养细胞是个细心活,慢慢来。一般消化时间约为1至3分钟,影响消化速度的因素较多,主要有胰酶溶液的活性(配制条件、冻存或4℃保存时间长短、是否反复冻融、化冻后存放时间及温度等)、消化时的温度(气温、细胞培养瓶及胰酶溶液的温度)以及所加胰酶溶液的多少等 ,加入胰蛋白酶-EDTA溶液,视细胞瓶的大小加入体积为2ml或更多(依培养器皿的大小而定),以使充分浸润;

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