iPS细胞在复苏培养的过程中容易遇到的问题有哪些？

培养细胞不贴壁？ 悬浮细胞成簇？原代细胞培养物污染？培养细胞死亡等问题。

在传代的过程中要注意：当集落变得较大、中心变得密集、明亮（对比边缘），相邻的集落开始融合时，此时可进行传代。

将培养皿/板/瓶置于37℃培养箱中，每天更换培养基（换液不需要再添加Y27632，但培养基需提前预热）。

iPS细胞是个很难养的细胞，MYC 诱导建立 iPS 细胞，培养时无需饲养层细胞通常情况下这个细胞复苏率很低，原因在于iPS细胞复苏过程中，通常需使用iPS细胞复苏培养基，复苏效率才可大大提高，而一般的细胞培养基完全不能达到这个效果。
iPS细胞在复苏过程中，转移细胞、吹打混匀和重悬细胞时，吹打力度要轻柔，并尽量减少吹打次数，细胞接种后，即刻在显微镜下观察细胞团块的大小，4 ~ 10个细胞的团块为最佳。如果吹打力度过大或次数过多，导致细胞分散成单细胞，细胞复苏率将偏低。
所以在开始复苏前，将所有试管、预热后的培养基和培养皿准备好，已确保尽快完成复苏过程。