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最近好几次Western blot出来的结果不满意,怎么办呢?

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dxy_btpk2zd7

Western Blot 曝光出来条带发黑发暗,没有出现荧光,而且出现过好几次这种情况,可咋整??

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8 个回答

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丁冉1234

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有可能是曝光液时间久了失效或是条带上沾了太多的曝光液

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dxy_nkqusvl2

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二抗孵育时间过长,或者是未能完全封闭,建议重配封闭液,充分溶解

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半糖奇朵

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是所有的条带都是这样吗?如果是都是这样,要考虑转膜,封闭的问题;如果只是一个目的分子的条带这样,那就局限在这个目的分子这里,看看抗体稀释比例或者稀释液这些

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洛噜啦噜啦嘞

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一般是显色液不足导致的,建议考虑一下

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未来9

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有可能是显色液的问题,你可以重新配好显色液,然后滴加到PVDF膜上,正反都加一遍,注意避光操作

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天一湖医者

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封闭没有做好,抗体有比较严重的非特异性吸附。解决:用5%的无糖低脂的奶粉做封闭,效果比BSA的还好还便宜。时间要摸索下。

环境光源污染。解决:一个好的暗室。

试剂问题。配置新鲜的试剂。

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Eason老歌迷

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时间太长了?时间越长荧光越弱。或者看看封闭问题

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bamboopiggy

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抗体是反复用的吗?可能是抗体坏了。如果是新抗体,可能需要摸条件

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