【求助】PCR和Western的结果不相符
丁香园论坛
10893
新生,第一次来发帖,
请教:
PCR做出加药后上调的趋势,但是Western却是下调。
应该怎么解释呢?
如果能附上相关文献的检索就更好了。
谢谢!!!
请教:
PCR做出加药后上调的趋势,但是Western却是下调。
应该怎么解释呢?
如果能附上相关文献的检索就更好了。
谢谢!!!
在回答这个问题前,请楼主回答几个问题:
1、你的“PCR和Western的结果不相符”这个结论,是重复几次试验后,观察到的结果?
2、你的PCR样品和WB样品来自体外还是来自体内?
3、你的PCR是常规PCR,还是定量PCR,还是定量RT-PCR?
4、你的PCR和WB中,阳性和阴性对照分别是什么?
5、你的药物,可能在哪个水平发挥作用?
6、你的药物做了几个稀释度,做了几个时间点?
生物学实验的两大基本准则是“对照”和“重复”,你都没有交代清楚,谁也无法答复你的问题。
1、你的“PCR和Western的结果不相符”这个结论,是重复几次试验后,观察到的结果?
2、你的PCR样品和WB样品来自体外还是来自体内?
3、你的PCR是常规PCR,还是定量PCR,还是定量RT-PCR?
4、你的PCR和WB中,阳性和阴性对照分别是什么?
5、你的药物,可能在哪个水平发挥作用?
6、你的药物做了几个稀释度,做了几个时间点?
生物学实验的两大基本准则是“对照”和“重复”,你都没有交代清楚,谁也无法答复你的问题。
LZ的问题似乎更关注寻找结果不符的依据 多过对实验本身可信度的分析。
如果是这样的话,不就是自己查文献嘛,谁知道你做的是什么东西
如果是这样的话,不就是自己查文献嘛,谁知道你做的是什么东西
是啊,做的是什么?
我做的PCR是半定量的反转录PCR
刚开始做 技术不好 可能结果不准……
我会继续重复实验的。
谢谢大家的支持……
春节快乐!
刚开始做 技术不好 可能结果不准……
我会继续重复实验的。
谢谢大家的支持……
春节快乐!
Repeat the WB first; acoording to your "可能结果不准……", so that you could know
if prorein level really changes or not . Then semi-qRT_PCR, using the internal control, at least two , e.g. beta actin plus GAPDH .
if prorein level really changes or not . Then semi-qRT_PCR, using the internal control, at least two , e.g. beta actin plus GAPDH .
谈点看法,楼主说PCR做的是半定量,我不太知道什么叫半定量,可能就是普通的PCR啊,理论上来说普通的PCR是没有办法达到定量的目的的,因为进入平台期以后,产物量和初始标本量是不成正比的,这就是为什么要使用荧光PCR定量的目的。
抛开可能存在的技术问题不谈,对于某个基因的调节也存在post-transcription的调节,也就是说绝对不是转录水平和翻译水平是完全一致的,不是说一个分子mRNA上调,那么蛋白肯定上调,因为存在mRNA的修饰,运输,降解和其他一些samll RNA,比如miRNA的调节,因此理论上mRNA水平和蛋白水平也不一定是一致。
抛开可能存在的技术问题不谈,对于某个基因的调节也存在post-transcription的调节,也就是说绝对不是转录水平和翻译水平是完全一致的,不是说一个分子mRNA上调,那么蛋白肯定上调,因为存在mRNA的修饰,运输,降解和其他一些samll RNA,比如miRNA的调节,因此理论上mRNA水平和蛋白水平也不一定是一致。
本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴
师兄微信号:shixiongcoming