羊水细胞培养时，如何判断收获细胞的最佳时机？血性羊水如何处理？

羊水细胞普通培养法

1．一切操作均在严格无菌条件下进行，抽取羊水20～30ml，立即送往实验室。

2．将穿刺所得羊水离心（1500r/min）5分钟，而后在接种箱内吸出上清液留其他检查用，将剩下的0.5ml沉淀在管底的羊水细胞轻轻打匀，分别接种在两个盛有培养液的无菌培养瓶内，充分混匀，放入37℃5%CO2培养箱。

3．培养液有市售羊水培养液、张氏培养液或自制的F10培养液，L-谷氨酰胺，加小牛血清双抗，PH调至6.8,使用1周重新配制。

4．观察换液,培养5～7天，羊水内有活力的细胞就贴在瓶壁上，并开始生长，可在倒置显微镜下观察生长情况。如细胞已贴壁生长，以后每1～2天在倒置显微镜下观察一次。贴壁细胞的形态大多数为上皮样细胞，换液后成纤维细胞呈大片生长。

羊水细胞的收获时间

准确掌握羊水细胞收获时间是羊水细胞培养成功的关键。有以下标志即可收获：

1．培养瓶中有4～6个较大的细胞“克隆”；

2．细胞“克隆”中存在宛如明珠的分裂细胞，有时互相连接，成双成对，能在一个视野中计数10～15个球形细胞；标记一个视野的细胞数，弃去培养液加入秋水仙素和新鲜培养液继续培养。

掌握好羊水细胞收获的时机，当在倒置显微镜下观察到有多个良好的贴壁生长的梭形细胞克隆，可见较多透亮的圆形和双圆形细胞时，这是成功的关键。

细胞密度不要太大，指数生长期的细胞分裂最旺盛，除红细胞可以加红细胞裂解液

离心后吸去上清液

留下的细胞沉淀

6. 用1ml BioAMF-2 重新悬浮细胞块

1ml BI羊水培养基重新悬浮细胞

7. 取35mm培养皿，在盖子上面及下半部侧壁都做好标记（包括编号，姓名等）。为便于移动和观察，将两个小培养皿放入一个90mm培养皿中操作。

8. 滴加0.5ml细胞悬液至每块盖玻片中央，用移液管尖小心摊开（注意避免流出盖玻片外）。

接种细胞

将细胞悬液摊匀在盖玻片上

轻轻放入培养箱

9. 24小时之后，给每块盖玻片补加1.1ml BioAMF-2。
10. 当克隆大小、数量合适并显示有丝分裂迹象时收获细胞（培养7天后）。

羊水细胞的收获时间

1．培养瓶中有4～6个较大的细胞“克隆”；

2．细胞“克隆”中存在宛如明珠的分裂细胞，有时互相连接，成双成对，能在一个视野中计数10～15个球形细胞；标记一个视野的细胞数，弃去培养液加入秋水仙素和新鲜培养液继续培养。

对于新鲜血性羊水在采集到样本后，一定要及时送往实验室离心，避免血液凝集过程中将活性羊水细胞包裹，如发现血液污染严重，可以加入1滴无菌肝素溶液，轻轻混匀。羊水接种培养7d后，观察生长情况，对于严重血性羊水进行半量换液，其他样本均全量换液，所有换出来的液体转移到新的培养瓶中加入新鲜培养液继续培养。