请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力，具体步骤？按照正常贴壁的做过几次，上室种2万了细胞，染色没有细胞。

可能是细胞数太少了 可能尝试种多一点 种4万或者8万试试看

1．所有细胞培养试剂和细胞培养池放在37℃温育；

2．待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤1次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105 /ml；

3．如进行侵袭实验，将Matrigel胶从-20℃取出于4℃冰箱过夜，在4℃条件下将Matrigel胶用无血清的细胞培养基稀释至300 μl/ml，取100 μl均匀涂抹一层于细胞培养池的PET膜上表面，然后将培养池轻轻放入24孔板孔内，37℃放置3 h左右，取出于超净工作台过夜干燥。

注：如进行迁移实验，则跳过这一步骤

4．在下室（即24孔板底部）加入600－800 μl 含10％血清的培养基，上室加入100－150 μl细胞悬液，继续在孵箱培养24 h；

5．将其下表面浸泡在70%甲醇溶液中，固定30 min~60 min，用结晶紫或台盼蓝染色，镜检，并计算PET膜下表面的细胞数，计算中间和四周5个视野，取平均值。

5实验结果

镜下对染色后的细胞进行计数，计数值高，则该组细胞迁移/侵袭能力强。

悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室，移除上室，用倒置显微镜观察可直接计数，在高倍镜下随机选取5个视野进行计数，最后计算平均值。或者收集下室培养液，用流式细胞仪计数

悬浮细胞做transwell的实验步骤可以参考下文：

https://www.renrendoc.com/paper/107279225.html