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丁香通

请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力,具体步骤?按照正常贴壁的做过几次,上室种2万了细胞,染色没有细胞。

相关实验:细胞划痕实验

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而这两

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4 个回答

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dxy_vt9uvab5

有帮助

可能是细胞数太少了 可能尝试种多一点 种4万或者8万试试看

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天一湖医者

有帮助

1.所有细胞培养试剂和细胞培养池放在37℃温育;

2.待测细胞培养至对数生长期,消化细胞,用PBS和无血清培养基先后洗涤1次,用无血清培养基悬浮细胞,计数,调整浓度为2×105 /ml;

3.如进行侵袭实验,将Matrigel胶从-20℃取出于4℃冰箱过夜,在4℃条件下将Matrigel胶用无血清的细胞培养基稀释至300 μl/ml,取100 μl均匀涂抹一层于细胞培养池的PET膜上表面,然后将培养池轻轻放入24孔板孔内,37℃放置3 h左右,取出于超净工作台过夜干燥。

注:如进行迁移实验,则跳过这一步骤

4.在下室(即24孔板底部)加入600-800 μl 含10%血清的培养基,上室加入100-150 μl细胞悬液,继续在孵箱培养24 h;

5.将其下表面浸泡在70%甲醇溶液中,固定30 min~60 min,用结晶紫或台盼蓝染色,镜检,并计算PET膜下表面的细胞数,计算中间和四周5个视野,取平均值。

5实验结果

镜下对染色后的细胞进行计数,计数值高,则该组细胞迁移/侵袭能力强。

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bamboopiggy

有帮助

悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室,移除上室,用倒置显微镜观察可直接计数,在高倍镜下随机选取5个视野进行计数,最后计算平均值。或者收集下室培养液,用流式细胞仪计数

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未来9

有帮助

悬浮细胞做transwell的实验步骤可以参考下文:

https://www.renrendoc.com/paper/107279225.html

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