请问悬浮细胞如果做transwell 测细胞的迁移能力？如果按照贴壁细胞的做法，悬浮细胞会附着在小室下层膜么，会不会直接掉落？

会掉落，也会附着。由于某些细胞自身的原因或某些膜的关系，有时细胞在穿过膜后不能附着在膜上，而是掉进下室

可能会掉落，看到细胞不正常贴壁也不要紧张，是正常现象。

1．所有细胞培养试剂和细胞培养池放在37℃温育；

2．待测细胞培养至对数生长期，消化细胞，用PBS和无血清培养基先后洗涤1次，用无血清培养基悬浮细胞，计数，调整浓度为2×105 /ml；

3．如进行侵袭实验，将Matrigel胶从-20℃取出于4℃冰箱过夜，在4℃条件下将Matrigel胶用无血清的细胞培养基稀释至300 μl/ml，取100 μl均匀涂抹一层于细胞培养池的PET膜上表面，然后将培养池轻轻放入24孔板孔内，37℃放置3 h左右，取出于超净工作台过夜干燥。

注：如进行迁移实验，则跳过这一步骤

4．在下室（即24孔板底部）加入600－800 μl 含10％血清的培养基，上室加入100－150 μl细胞悬液，继续在孵箱培养24 h；

5．将其下表面浸泡在70%甲醇溶液中，固定30 min~60 min，用结晶紫或台盼蓝染色，镜检，并计算PET膜下表面的细胞数，计算中间和四周5个视野，取平均值。

5实验结果

镜下对染色后的细胞进行计数，计数值高，则该组细胞迁移/侵袭能力强。