闭门羹牛
大草原的小灰驴
细胞冻存管融化
1.将细胞冻存管取出,浸入37℃水浴锅内,轻轻晃动,注意融化,当融得只剩一个小冰块时,将细胞插入冰中。
2.加入4℃预冷的培养基,用手指轻弹悬浮细胞团。
3.250g离心10min,去除上清液,再加入培养基,轻轻悬浮。
4.尽量将细胞中的DMSO洗去,计数。过程一定要慢,DMSO能减少冰晶伤害。在细胞复苏过程中,要快,以减少融化对细胞的伤害,其实还是冰晶的问题。DMSO浸润的细胞非常脆弱,所以可要尽快将DMSO去除。
bamboopiggy
遵循慢冻速溶,放液氮保存,一般没问题,细胞有小黑点可能是血清不好,换一下血清
balalaLy
1,细胞冻存前状态就不好
2,冻存操作不规范
3,刚复苏状态不好有黑点其实也属正常,传两代养着养着就好了
4,可以尝试使用无血清冻存液,效果挺好的。
未来9
复苏效果不太好是不是操作不规范或者细胞数目太少。
黑点需要鉴别是污染还是细胞碎片。
天一湖医者
细胞数太少,细胞也会害怕孤独,健康生长需要细胞间的连接,冻存时细胞浓度低于1-undefined105个/ML,复苏很难成功的。解决:细胞计数,离心后调整细胞浓度。记得不要重新洗细胞,刚复苏的细胞比较脆弱。
Eason老歌迷
AR42J细胞冻存后有一定复苏难度。因其生长非常慢,不易贴壁,从复苏到正常培养传代这个过程,通常需要10~14天,需要多一点耐心;复苏第2天可观察漂浮的细胞,状态是否良好。第4~5天有少量贴壁,且有密度依赖;细胞增殖过程中会产生少许细胞碎片和黑点,这属于正常现象,及时换液除去即可;每2~3天换液一次。