丁香实验_LOGO
登录
提问
提问
我要登录
|免费注册
丁香通

悬浮性细胞应如何传代处理?

user-title

Eason老歌迷

细胞传代培养实验中,悬浮性细胞应如何传代处理?

wx-share
分享

4 个回答

user-title

bamboopiggy

有帮助

如果细胞密度够,可以直接吸出一部分加培养基,如果细胞密度不够,可以离心后取沉淀加入培养基

user-title

天一湖医者

有帮助

悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮生长细胞的传代培养要比贴壁细胞简单得多,通常有两种方法。

1.直接给带传代的培养瓶中补充一定量的新鲜培养基,然后将进行分装。

2.先通过离心弃掉营养匮乏的旧培养基,然后再用适量的新鲜培养基重悬细胞沉淀,最后将其分装至培养瓶中即可。

悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。

悬浮细胞的传代方法有2种

1、直接传代法:

①待悬浮细胞长满至80%-90%左右(细胞悬液变黄),即可传代;

②用吸管吸弃细胞悬液1/2~2/3;

③加入适量的新鲜培养基,继续培养。

2、离心传代法:

①将细胞悬液转移到离心管内;

②150g离心5min,弃上清;

③使用新鲜的培养基重悬细胞;

④吸管吸取适量细胞悬液,装入新的培养瓶,再加入适量的新鲜培养基,继续培养。

user-title

dxy_gwrp7ndq

有帮助

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,将细胞悬液移入离心管中,1000 rpm/min 室温离心5 min。弃上清,细胞沉淀用完全培养液重悬,按要求分瓶(视细胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加完全培养液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培养。有些悬浮细胞趋于成团生长,此时细胞生长状态良好,当补液时,需避免反复吹打。

user-title

府宅

有帮助

一般实验室中常用直接传代法和离心传代法(在发现有细胞碎片的情况下)来处理悬浮细胞

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
关注公众号
反馈
TOP
打开小程序