293 细胞冻存一定要加血清吗？我们根据卖家提供的无血清培养基和冻存步骤进行冻存建库，总是复苏不起来，活不过两代就死翘翘了～

冻存的细胞状态必须好且处于对数生长期，该用90%血清+10%DMSO，可能会取得好的效果；复苏的温度应在39-40度之间，复苏与冻存正好相反，应该速溶速化。

如果不加任何条件直接冻存细胞，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、pH值改变、蛋白变性等，从而引起细胞死亡。

而细胞冻存液就相当于细胞的保护剂，在冻存细胞时将细胞悬浮于冻存液中，可使冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞，可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。这样就使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要时直接复苏就可恢复细胞活性。

293比较脆弱吧，用无血清冻存液也可以，但是需要记得慢冻速溶。放冻存盒里冻，37度迅速溶解。

细胞培养可以不用血清，冻存可以用无血清冻存液