Elisa检测细胞培养上清内的细胞因子与血清中细胞因子的检测结果趋势不一致，是怎么回事？血清中细胞因子浓度有差异，上清中没有差异

检测细胞因子的技术大致可分为3类：生物活性检测法、免疫学细胞因子直接定量法、分子杂交检测法。但因分子杂交检测法及生物活性检测法所要求的实验室条件较高，目前多数采用抗原检测的经典方法——ELISA法。

ELISA虽操作简单，但一次只能检测一种细胞因子，需要抗原包被，样本需求量大，实验时间大于24小时，且有酶-底物的背景干扰，无法反映细胞因子之间的网络关系。

他俩本来就有差别。

Elisa检测细胞培养上清内的细胞因子与血清中细胞因子的检测结果趋势不一致，需要注意以下原因，1.操作前应对试验的物理参数有充沛的了解，如环境温度(保持在18 c～25℃)、反响孵育温度和孵育时刻、洗刷的次数等，要先查看水育箱温度，是否符合要求。

2. 正确运用加样器加样器应笔直参加标本或试剂，ELISA试剂盒防止刮擦包被板底部。加样过程中防止液体外溅，血清残留在反响孔壁上，加样器吸头要清洗干净，防止污染，加样次序要与说明书共同，否则可导致成果过错，试验重复性差。

3. 手工洗板加洗液时冲击力不要太大，洗刷次数不要超越说明书引荐的洗刷次数，洗液在反响孑l内滞留的时刻不宜太长。不要使洗液在孑l间窜流，形成孔问污染，导致假阴性或假阳性。

4. 要保证加液量共同 我们在运用时感觉滴瓶加液不如加样器好，滴瓶不易控制加液量禁绝，形成显色不统一，判别过错。

5. 显色液量不行过多 加样的工作环境不能处于阳光直射的环境下，加显色体系后要避光反响，显色液量不能过多，避免显色过强。ELISA试剂盒的影响因素应选用有国家批准文号，质量靠得住的产品，不能图廉价，忽视质量保证。试剂应妥善保存于4℃冰箱内，在运用时先平衡至室温，不同批号的试剂组分不宜交叉运用。试剂敞开后要在一周内用完，剩下的试剂下次用时应先查看是否蜕变，显色剂如被污染变色将形成全部显色，导致过错成果。

1.要么就是细胞分泌的因子确实没有改变，而在体是有改变的。2，先确定你用的细胞是否正确。再进行刺激，看刺激后有没有改变