有人会分离原代的外周血细胞吗？我想分离外周血细胞做为APC，我们实验室没有这个平台，请问分离这个需要什么，有什么注意事项呀？

可以用肝素抗凝血，加入淋巴细胞分离液，梯度离心法提取单个核细胞，作为apc

PBMC原代分离步骤

1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鲜血液，加入PBS按1：1稀释血液（一般采血管2mL+2mL）。

2) 取淋巴细胞分离液5mL于15mL灭菌离心管中待用。

3) 吸取稀释血液，在离分层液上方1cm处，沿试管壁徐徐加入，使稀释血液重叠于分层液上，并与分离液形成明显界面。

4) 室温，离心2000rpm，20min。此时离心管中形成5层：最上面是血浆，血浆层和淋巴细胞分离液之间是淋巴细胞层呈白膜状。

5) 小心吸取中间呈白膜状的单个核细胞层，尽量全部吸出单个核细胞。加5倍以上体积的PBS洗2次，每次离心1500rpm，10min。

6) 去上清液，加入1640培养基1mL混匀，取少量进行细胞计数。

7) 用台盼蓝染液检查所分离的细胞活性：取2滴细胞悬液加1滴2%台盼蓝染液，5-10min后取样作湿片高倍镜检。活细胞不着色，死细胞染成蓝色。计数200个细胞，计算活细胞百分率，活性应在95％以上。