外周血白细胞的分离

一、自然沉降法

人外周血红细胞与白细胞的比例约为6000～1000:1，两类细胞的沉降速度不同，据此加以分离。自然沉降法是利用红细胞自然沉降率较快加以分离。该法简便易行，对细胞损伤少，但纯度差。

[试剂及配制]

（1）无Ca2+、Mg2+，Hank’s液

（2）含10%～20%灭活小牛血清Hank’s液

[操作方法]

（1）取静脉血2ml，放入加有抗凝剂的试管中，轻轻混匀；

（2）将试管直立静置于室温或37℃温箱中30～60min，待红细胞自然沉降。此时可见试管中的悬液分3层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，在紧贴红细胞层上有一呈灰白色的白细胞层；

（3）用毛细管吸取位于红细胞层上面的富含白细胞的细胞悬液，移入另一试管中；

（4）加入无Ca2+ 、Mg2+Hank’s液至离试管口3cm处，混匀，以水平离心机2000r/min离心10min，弃上清，同法在洗涤两次

（5）沉淀细胞用适量10%～20%灭活小牛血清的Hank’s液重悬，计数，配成所需的细胞浓度的悬液，一般常用2×106/min。

二、加速红细胞沉降法

利用高分子量的聚合物促使红细胞凝聚成串钱状，从而加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。常用的高分子聚合物有明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）及甲基纤维素等。

[试剂及配制]

（1）3%明胶（粘度为25泊以上）：选取优质明胶，用生理盐水配成3%溶液，置沸水浴加热溶解，分装，高压蒸汽灭菌8磅15～20min。

（2）6%右旋糖酐（分子量200～400KD）：用生理盐水配制。

[操作方法一]

（1）取抗凝静脉血加入等量3%明胶盐水溶液中，混匀；

（2）将试管直立静置室温或37℃温箱中30～60min，利用明胶与红细胞的粘合作用，促使红细胞快速下沉，而白细胞留在明胶溶液中；

（3）用毛细吸管吸取富含白细胞的上层液，移入另一试管中；

（4）按上述自然沉降法（4）～（5）操作。

[操作方法二]

（1）取抗凝静脉血加入等量6%右旋糖酐溶液中，混匀；

（2）按第一种操作方法的（2）～（4）操作。