蛋白条带的问题求助，各种有问题的条带

各位老师好，这是我的大致实验步骤

提的蛋白是细胞的总蛋白，我的上样量是10-20ug，电泳时候的电压在130-160V之间；

转膜是半干转的方法，电流是总膜面积乘以3，时间是36min ;

封闭用的是碧云天的快速封闭液，4° 2h

一抗冰箱4°过夜，二抗用的是全式金的兔抗和鼠抗，一抗二抗稀释都是1:1000，用的也是碧云天的抗体稀释液（我的一抗没有猪种属特异性的抗体，所以用的是人或鼠特异性的抗体）

洗膜是10min，3-4次。

曝光液1:1配置，2ml，自动曝光。