蛋白条带的问题求助，各种有问题的条带

只想顺利读博

2022-04-13

各位老师好，这是我的大致实验步骤

提的蛋白是细胞的总蛋白，我的上样量是10-20ug，电泳时候的电压在130-160V之间；

转膜是半干转的方法，电流是总膜面积乘以3，时间是36min ;

封闭用的是碧云天的快速封闭液，4° 2h

一抗冰箱4°过夜，二抗用的是全式金的兔抗和鼠抗，一抗二抗稀释都是1:1000，用的也是碧云天的抗体稀释液（我的一抗没有猪种属特异性的抗体，所以用的是人或鼠特异性的抗体）

洗膜是10min，3-4次。

曝光液1:1配置，2ml，自动曝光。

bamboopiggy

2022-04-13

有帮助

条带都能过去，就说明问题不大，感觉要么是你加抗体的时候，抗体和膜接触不匀，要么就是你转膜的三明治夹子夹的不匀。

喵喵喵柏

2022-04-13

有帮助

不知道你具体的问题是什么

第一张图的右下角你应该是有一个气泡，所以条带上面有一个小白点

如果你的问题是他不是单个的条带，有很多条带的话，需要看一下你的抗体是不是多克隆的

剩下的几个你可以调整一下，把背景跟条带的对比度调的大一点

最后两张膜你应该是发光的时候折了一下膜，膜上有折痕就会出现这种印记