曝光问题求助，背景很黑条带几乎看不到，是怎么回事呢

请贴一个图片

背景黑可以用软件调整，需要区分是多克隆抗体，还是封闭不好，还是没有调整好呢？

1.二抗浓度可能高了，并且洗膜时间不够，最后洗6次，每次5min

2、膜被曝光了

原因：

封闭没有做好，抗体有比较严重的非特异性吸附。解决：用5%的无糖低脂的奶粉做封闭，效果比BSA的还好还便宜。时间要摸索下。

环境光源污染。解决：一个好的暗室。

试剂问题。配置新鲜的试剂。

你的内参也是这样吗？如果不是考虑抗体问题，如果也是，封闭牛奶和BSA都试试

你二抗用1:4000试试，可能是是二抗太浓了。但也可能是你一抗不特异。