硬着头皮往前
请问大佬们,我最近复苏细胞总是第二天观察到不贴壁,但悬浮的又不像是细胞碎片,而是正常形态,这是哪一步操作没对吗?
我一般是从 - 80 取出来,离心,弃上清,然后补培养基,培养。而且复苏细胞都是取得不同批次冻存的,血清这些条件都没变
biu2266
复苏血清浓度要提高,细胞密度最好增加
yhzlqy
细胞类型是贴壁依赖生长的吗?培养皿规格型号也要符合要求
提问者:是的,是贴壁细胞。我一直用的 corning 的培养瓶,以前复苏基本上第二天全都能贴壁,最近就很奇怪。
我复苏时,是先放到 37 度复苏,然后把操作台擦了之后,再取出来,1000rpm,5min 离心
yhzlqy
培养皿和复苏过程都没有问题的话,考虑冻存前细胞活力及冻存过程。
提问者:我现在也怀疑冻存过程可能有了问题,我以前是 4 度放 4-5min,然后 - 20 度放半小时,再移到 - 80。现在我是 4 度放半小时,-20 度放 1 小时,然后放 - 80。这两种冻存方法我看网上都有,到底哪一种更好呢?