细胞复苏之后，为什么聚团？

首先，常规的“抱团”是指贴壁细胞被消化后悬浮状态下的聚集情况。细胞在贴壁生长时，聚集在一起是正常现象。当周围细胞寥寥无几，而这一团已经叠层生长，这就是在悬浮状态就已经聚团的细胞再贴壁导致的。相同条件下，培养的癌细胞对密度依赖性的生长抑制敏感性降低，所以即使在形成单层后，也不会停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体。

其次，部分细胞被污染后会出现细胞聚团，这和操作有很大关系，比如：传代铺板时，是否进行了活细胞计数并及时调整浓度；终止消化时间点是否准确；混匀是否过于轻柔或粗暴；胰酶是否浓度过高；离心收集时，加速度是否过大等，都会直接影响子代细胞状态。

另外，过度消化细胞、状态不好的老化细胞也可能会出现聚团。很多人觉得细胞多多益善，经常将贴壁细胞养到叠层、或密集程度特别高时才进行传代，如果一直这样，不仅会缩短传代时间，导致操作密集；同时细胞的老化会更加严重。另外，细胞死亡时释放DNA，会“抓住”其他细胞，形成黏性的细胞团，若不及时处理，整体细胞状态会恶性循环。

一些悬浮细胞抱团生长这是正常现象，大部分悬浮细胞在细胞密度很高的情况下，很可能会出现部分细胞抱团生长的现象，聚团细胞很容易死亡并演化成絮状物，殃及周围的悬浮细胞，因此在培养悬浮细胞时需控制好细胞密度。

如果出现了细胞团，可以通过细胞筛去掉部分较大的细胞团，也可以尝试一下方法：将细胞悬液收集到15 ml离心管中，静置20 min左右，小心取上层细胞上清培养(该方法只能去除部分较大的细胞团)。

这个和细胞复苏不复苏没有什么大关系，估计就是铺板不匀造成的。

细胞抱团的原因有以下几项：

1.细胞死亡释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团（消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等）。

2.细胞离心速度过大或时间太长。

3.消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难！

4.状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱团生长的情况（比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差）。

5.传代时没有吹打均匀，细胞团多，培养时就会是一团一团的。

6.传代后细胞铺板不均匀。

7.有可能是杂细胞，或者死细胞。

8.接种不均匀，或者是细胞未消化开。

9.非震荡培养或细菌（胞）量过多的话就会成团。