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免疫细胞化学检测采用SP法和SABC法的结果为什么不一致?

相关实验:外周血免疫细胞检测

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丁香实验

我用免疫组化方法检测细胞内survivin蛋白的表达。开始是用博士德的survivin抗体,博士德的免疫组化试剂盒(SABC)。检测的结果是在lovo人结肠癌细胞中survivin蛋白高表达。但是采用SP法来检测则得出相反的结果,DAB显色表现为survivin蛋白表达低(同样显色5分钟)。
我的操作过程:
4%多聚甲醛固定,h2o2-甲醇灭活内源性过氧化物酶,封闭,孵育一抗(survivin博士德,后来是用的santa公司的 1:500)。4度过夜;孵育相应二抗,孵育SP或SABC试剂,洗涤,DAB显色5分钟。

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7 个回答

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西柚味的芋圆

有帮助
那只能重新检测一下标本,同时做俩种方法,确保所用的一抗识别同一克隆位点
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CXCR3

有帮助
建议使用同一个组织的样本,同时用两种方法标记,对比一下效果。
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sk1981521

有帮助
两用方法的原理是一样的,SABC法比SP法多了第三部的一个放大作用,因此检测的敏感性要高一些
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dxy_0mxazdaw

有帮助
这种情况需要你从自己的样本上找原因,建议你同时利用两种方法去检测同一批样本,以避免样本出现降解,存放时间太久或者污染等原因。
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txs900416

有帮助
sabc法比sp法要灵敏,sp法hrp直接和亲和素连接的,sabc中是亲和素-生物素-hrp,sp法容易受空间位阻影响,灵敏度不如sabc
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peaceful13

有帮助
主要应该是抗体的原因吧~抗体的克隆位点不同~得到的检测结果也会不太一样~
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Timy最爱柠檬水

有帮助
1.确定抗体结合位点是否统一; 2.样本是否为同一来源;
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