免疫组化SABC法与SV法
互联网
实验原理
SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法。
生物素是一种水溶性维生素(即维生素H)，分子量244。生物素活化后，可以标记抗体和酶而不影响其活性。链霉亲和素—酶复合物可以起到放大信号的作用，这是SABC具有高度敏感性的基础。
实验试剂
1. 即用型SABC(过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SA1021，SA1022)
2. 即用型SV(HRP辣根过氧化物酶)试剂盒(博士德货号SV0001，SV0002)
5. 所选一抗：KCA3.1(BA1788)；PCNA(BM0104)；Vimentin(BM0135)( 博士德公司)
实验设备
实验材料
实验步骤
2. 新鲜配置3%H2 O2 ， 室温10分钟，灭活内源性酶，然后用蒸馏水冲洗2分钟三次；
3. 微波修复：将切片放入盛有PBS缓冲液(PH7.2-7.6)的杯子中，在微波炉里加热煮沸，微波炉中静置５分钟，拿出室温冷却６分钟，再微波续热至沸腾后完全室温冷却；
4. 滴加5%BSA封闭液，37℃反应30分钟。甩去多余液体，不洗；
5. 滴加一抗，4℃反应过夜。所配一抗的浓度为1µg/ml；
6. PBS缓冲液(PH7.2-7.6)洗10分钟×3次，滴加生物素化二抗IgG(抗兔或抗鼠)37℃反应30分钟；
7. PBS缓冲液(PH7.2-7.6)洗10分钟×3次，滴加试剂SABC，37℃反应30分钟，PBS洗30分钟×3次；
9. 滴加苏木素轻度复染60秒，蒸馏水洗涤后浸入饱和Na2 HPO4 溶液中2分钟，取出后洗涤，37℃恒温箱干燥过夜，中性树胶封片。
2. 新鲜配置3%H2 O2 ，室温10分钟，灭活内源性酶，然后用蒸馏水冲洗2分钟三次；
3. 微波修复：将切片放入盛有PBS缓冲液(PH7.2-7.6)的杯子中，在微波炉里加热煮沸，微波炉中静置5分钟，拿出室温冷却６分钟，再微波续热至沸腾后完全室温冷却；
4. 滴加5%BSA封闭液，37℃反应30分钟。甩去多余液体，不洗；
5. 滴加一抗，4℃反应过夜，所配一抗的浓度为1µg/ml；
6. PBS缓冲液(PH7.2-7.6)洗10分钟×3次，滴加HRP标记二抗IgG (抗兔或抗鼠)37℃反应30分钟，PBS缓冲液(PH7.2-7.6)洗30分钟×3次；
8. 滴加苏木素轻度复染60秒，蒸馏水洗涤后浸入饱和Na2 HPO4 溶液中2分钟，取出后洗涤，37℃恒温箱干燥过夜，中性树胶封片。
