用 -70℃ 冰箱细胞冻存复苏成活率低的原因有哪些？

恩，关键还是慢冻快复的原则，阶梯型降温，快速复苏，-80半年是没有问题的，但是冻存细胞的状态得好啊，楼上举例的比例都是理想的可实现的，二楼说的也是对的，不排除此原因，我们常用的瞬转细胞-80即可但是也都是还要在液氮中~

1、细胞冻存于－70-80℃保存半年左右是没有问题的，关键是用于冻存的细胞首先状态要好，然后进行程序性降温，4度1h，-20度2h，后转移到-80度。当然也可以使用程序降温盒（提前拿出来解冻）。 2、DMSO的浓度10%左右为最好。 3、复苏和冻存的程序怎样才能达到最好效果？复苏和冻存的总的原则是慢冻速溶，复苏时预先打开水浴锅37度，将冻存细胞取出立即溶解，加入培养基后离心五分钟，重悬细胞后置于细胞培养瓶中培养。冻存的程序见第一条答案。 4、冻存液中的血清含量较高的话细胞冻存的效果会好一些，其实这个不是最关键的因素，最重要的是培养的细胞状态和冻存的程序。我们尝试过DMSO：培养基=1:9，DMSO:血清：培养基=1:2:7，DMSO：血清=1:9，细胞复苏之后状态都很好。

我有过搂主的经历！我分析可能有以下原因： 1.冻存过程中是否出现问题：细胞的状态如何、细胞的离心速度、冻存液比例、（我们一般是10％DMSO＋90％血清）等。 2.冻存温度的问题：目前认为液氮温度（-196度）是比较实际和理想的，因为细胞细胞生命活动几乎停止，如果保存得当，可以保存到10年以上！如果-70左右保存细胞，短期内对细胞无明显影响，但随细胞冻存时间延长，生存率明显下降！有文献报道，-70冻存SNL（一种小鼠成纤维细胞），一个月内复苏，生存率90％，而一个月之后生存率下降到50％！我想着可能是你复苏后细胞生存率下降的真正的原因把！建议你及早转移到液氮罐中！祝你好运！