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细胞复苏时如何换液呢?

相关实验:细胞冻存和复苏实验

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qiuningrel724

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11 个回答

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疯乐U2T5

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如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜完全培养基。


如果是悬浮细胞,可以用半量换液法,即吸去一半旧培养基,补充新鲜完全培养基。(会损失一半细胞)。悬浮细胞如果不想损失细胞,那就需要将培养物转移到离心管中,离心去除旧培养基,再用新培养基重悬细胞沉淀。


不光细胞维持培养时需要进行细胞换液,一些实验操作也需要进行细胞换液。当换液操作是实验需要时,可能在添加新的培养基前需要 PBS 清洗细胞以去除旧培养基的影响, 新添加的培养基也可根据实验需求进行特殊配制,不一定是完全培养基。

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说好普通话

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我觉得其实细胞换液和植物换水差不多
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elite_xy

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冻存细胞取出后37℃速溶,取15ml离心管,加入10ml含血清培养基,将冻存管中液体(通常1.5ml)也加入离心管中,习惯轻吹几下混匀,1200转常温离心5min,去掉上清,加入5ml含血清培养基,轻吹制成细胞悬液,加入到培养瓶中,即可。注意,新复苏的细胞不要经常去看去动。 换液的话,只要把培养基吸出,再加入新的培养基就可以了。如果你复苏的细胞长得很不均匀,可以胰酶消化下来再混匀后在重新加进去(像正常细胞一样做)
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wk125

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个人觉得这个和细胞本身有关可以离心,也可以不离心,贴壁细胞我一般喜欢加到细胞冻存也10倍体积培养基,待细胞贴壁,大概也就是12小时以后换下新培养基就OK了,悬浮细胞只能离心复数,如果贴壁细胞对DMSO敏感的话,那就像悬浮细胞一样离心后加新培养基。
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wolfman8403

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复苏后先补充培养基稀释DMSO,然后离心,去清液。补充培养基后待细胞稳定24小时,再更换培养基一次
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lidachuan227

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可以等细胞贴壁之后,用吸管把培养基吸出来,然后换成新鲜的。关于细胞培养的,来邦网也有一些,可以作为参考
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elsa_0521

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我一般都选择先离心,然后弃去培养液,即去除DMSO,加入新鲜培养液后接种于培养瓶或培养皿中
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shao95

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本实验室均采用第一种,因为离心导致细胞破碎说明细胞状态已经不好了,不如早点除去。DMSO对细胞有毒性,可能导致细胞变异等。
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默小菲

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neurotech二个方案我都用过,个人觉得还是第一种方案比较好,第一次复苏我用的第二种方案,结果我养的悬浮细胞全部贴壁生长了,一周前又用第一种方案复苏了两株细胞,现在细胞状态还不错。真心觉得DMSO不能留。
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alaling

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neurotech老兄说的第二个方案我用过,除非你的细胞很皮实,否则很容易让细胞在这24h内状态变差。不差那离心的几分钟,与重新复苏比起来,这点时间算占便宜了。
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neurotech

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两种方案可供选择: 一、复苏时,行离心,弃上清后,种入瓶中。主要目的是防止DMSO对细胞造成损害,但刚复苏的细胞教脆弱,离心易导致细胞破碎。 二、复苏时,直接将冻存管里的液体倒入培养瓶中,另外添加适量的培养基,孵箱24h,待贴壁后行常规换液。省去了离心一步,避免离心时细胞破裂。但DMSO未能去除,长时间培养可能会对细胞有损害。 个人觉得第二种方案较方便。
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