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科研学霸天团，48小时有问必答

问为什么细胞解冻后，活细胞占比较低?

huarenqiang5

出现低存活率的可能原因及解决方案如下：1.解冻过程中细胞裂解解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为106至107细胞/毫升。2.解冻过程中的问题解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的首选方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养。3.对冷冻液过敏解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在2

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问血清中的沉淀物对细胞培养有影响吗？

huarenqiang5

血清中的沉淀物对细胞培养没有影响。

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问间充质干细胞支原体污染后对细胞生长的影响？

huarenqiang5

支原体污染后对细胞的影响主要是:1.影响细胞的生长状态及形态。2.影响细胞的代谢和功能。

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问贴壁细胞转染48h，细胞会死亡，导致细胞数量不一致，怎么办？

汤姆卜丽波

一般转染试剂都会对细胞造成伤害，你可以适当调整转染试剂的浓度和时间

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问请问胰酶的加量和消化程度怎么判断呢？消化多久呢？加全培中和的话比例是多少比较好？

huarenqiang5

胰酶加量略盖过细胞即可，一般消化时间在1－3分钟比较合适。

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问细胞空隙之间有黑色点状物，多次传代之后仍然存在。请问这是什么？该如何去除?

asswei

1. 细胞碎片在细胞培养中不合适操作引起的化学或物理上的刺激，例如胰酶消化时间过长，会导致细胞死亡，从而产生很多碎片。2. 凋亡小体在体外培养条件下，细胞很容易受到环境改变的影响，诱发细胞的凋亡，产生凋亡小体。将细胞用 PBS 洗 2~3 遍，洗的时候，轻轻拍打培养瓶，让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落，再弃去 PBS，消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右，让细胞间隙中的颗粒和

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问293T细胞生长速度不稳定是怎么回事？

asswei

293T细胞很不好养，细胞贴壁性不是很好，且消化的度不是太好掌握，操作时动作一定要轻。如果细胞状态不好的话，考虑添加点NEAA。就是有的时候操作可能动作大了点，细胞就会破碎，293系列的细胞基本上都是这个特性，刚复苏的时候贴壁较慢，可以在培养箱多放一天让它多贴壁。平时培养过程中贴壁较差，拍打或液体冲洗都可以使细胞脱落，所以消化时间很快，胰酶可以适当降低浓度，不要加EDTA了，基本上不要放到37度的

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问293T细胞做慢病毒感染的条件是什么？

汤姆卜丽波

一般细胞密度长到大概70-80%就可以了

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问原代皮层神经元细胞培养为什么总是出现很多细胞碎片？

汤姆卜丽波

可能是你在消化过程中细胞损伤了，优化一下消化的条件

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问在诱导iPSC向NK细胞分化过程中，如何提高分化效率？什么因素可能会影响分化效率？

asswei

影响细胞分化的因素有：①胞外信息分子。包括近端组织的相互作用和远距离的信号分子。②细胞记忆及决定对细胞分化的影响，即在能识别一个细胞的分化以前，就有了一个预先保证细胞怎样变化的时期。③受精卵细胞质的不均一性对细胞分化的影响。受精卵中预先储存的隐蔽mRNA不均一的分配到子细胞中，从而决定子代细胞的分化命运。④细胞间的相互作用与位置效应。细胞所处的位置可导致细胞分化方向的改变。⑤染色质变化与基因重排对

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问细胞培养过程中那种检测方法检测支原体比较准确？PCR、试剂盒还是活细胞染色？

huarenqiang5

PCR 法检测支原体的方法最为快速、灵敏、取样量少，既可做细胞本身，也可做细胞上清的检测，同时可以检测多种支原体的污染，是目前常用的检测手段。

4 回答54 围观

问什么情况必须把培养瓶竖着养？ THP-1诱导巨噬细胞，为什么不成功？

huarenqiang5

由于THP-1有密度依赖，将培养瓶竖着放进培养箱（瓶盖朝上），可以增加细胞局部密度，从而促进细胞生长，注意瓶盖要保持透气。

3 回答101 围观

问细胞培养过程中有支原体污染怎么办？

asswei

支原体污染细胞后，有必要清除支原体，常用方法有：1）对于非重要、易培养的细胞，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。对于较为重要的细胞，如来源珍贵或保藏量较小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2）用 MRA 处理：用支原体清除剂（Mycoplasma Removal Agent）处理细胞，1-2 周可以清除支原体。3）用清洗纯化法清除支原体污染的方法：细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反

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问如何解冻血清不会使质量受损呢！？？？

balalaLy

放到4度缓慢解冻，分装到50ml管，避免反复冻融。

3 回答72 围观

问中性粒细胞铺板后迅速贴壁，铺不均匀怎么办？

毛利小五郎的徒弟

把中性粒细胞用pbs稀释后铺板，可以改善迅速贴壁

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问类器官培养时长得过快，总是易裂解

汤姆卜丽波

类器官培养一定要给够培养基你可以做一个配方梯度，选择最合适的培养基配比

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问细胞培养出现白色的一层膜是什么情况

loveliufudan

出现在细胞培养基上层的膜可能是由细胞分泌的胞外基质（extracellular matrix）或蛋白质组成的。这种现象通常被称为"细胞层上的蛋白质膜"或"细胞纺丝"。细胞分泌的胞外基质是一种由细胞合成和分泌的复杂混合物，其中包含许多蛋白质、多糖和其他分子。这些物质可以聚集在培养基表面形成薄膜状结构。这种现象可能是由于细胞在培养过程中增殖并分泌了大量的胞外基质，导致其在培养基上形成一层薄膜。这种膜通

4 回答89 围观

问培养液总出现沉淀，pH值不变怎么办？

汤姆卜丽波

有可能是培养基放久了，有些成分析出了，长期这样一定会影响细胞，配新的吧

4 回答131 围观

问H₂O₂诱导衰老时，除了设置空白对照以外，还可以怎样设计实验支持衰老现象是 H₂O₂引起的？

loveliufudan

在研究衰老过程中，除了设置空白对照组外，还可以采取以下实验设计来支持衰老现象与H2O2引起的关联：1. H2O2处理组：将细胞或生物体暴露于适当浓度的H2O2处理，以模拟衰老过程中氧化应激的作用。可以在不同时间点或浓度下进行处理，以观察细胞或生物体的衰老现象，如细胞增殖能力下降、DNA损伤、细胞周期改变等。2. 抗氧化剂处理组：在H2O2处理组中加入抗氧化剂，如N-乙酰半胱氨酸（NAC）、谷胱甘肽

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问如果用小鼠的不同组织进行切片和X-gal染色，观察到的蓝色细胞一定是衰老细胞吗？为什么？

asswei

常常检测SA-β-gal的活性将衰老的细胞和处于分裂静息期或者是终末分化状态的细胞区分开来，是目前应用最为广泛的细胞衰老的标志物之一。SA-β-gal检测方法主要分为细胞化学染色法和荧光法，人为给予β-gal作用底物X-gal和pH6的环境，衰老细胞可以在β-gal的作用下，将底物转变为深蓝色，使得发生衰老的细胞在普通光学显微镜下即可观察到。这种方法也具有一定的局限性。首先，SA-β-gal在正常

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