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科研学霸天团，48小时有问必答

问如何从细胞形态学上准备判断细胞是否已经老化了。

Eason老歌迷

可以使用细胞衰老检测办法。每张片子镜下计数四百个细胞，确定X-Gal染色阳性细胞（衰老细胞）在细胞群体中的所占的百分比即衰老细胞率（蓝染细胞数/总计细胞数×100%）。即可算出。

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问细胞支原体污染如何治疗与预防

Eason老歌迷

如何避免支原体污染:首先肯定是要做好细胞间消毒，确保操作时没有污染，做到正确操作，确保你的细胞培养操作器械无菌，可以在培养基中加入适量抗生素。出现支原体污染该如何应对:对于非重要的细胞，如培养中的细胞、WCB的细胞等，将培养物与用过的培养基灭活后丢弃即可。比较重要的细胞，用清洗纯化法清除支原体污染。

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问细胞抱团该如何处理？

Eason老歌迷

如果是贴壁很牢固的细胞，可以多批多次进行消化，这样可以很大程度降低胰酶对细胞的损伤，避免细胞抱团。不要整太高的细胞密度，细胞生长密度过高也比较容易形成细胞成簇，百分之七十到八十的密度就好，这样可以降低细胞抱团的几率。如果是肉眼可见，可先让细胞静置30秒左右，然后吸取上半部分没有抱团的细胞悬液来传代。如果细胞抱团肉眼不可见，也没啥好办法，重新培养吧

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问细胞不贴壁，怀疑是血清的问题，更换血清后，效果依然不好，还可能是什么原因导致的？

Eason老歌迷

细胞不贴壁有很多种原因导致的，你可以从多个角度来看。比如说是不是胰蛋白酶消化过多啊？是不是存在细胞污染，比如说支原体污染啊。或者你的培养基的问题，培养基pH值过碱；还有接种细胞起始浓度太低或太高啊。等等都可能引起

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问在对细胞进行梯度给药给药时，母液是用水配的，浓度过低，那么在用培养基稀释药物时，细胞最低能接受稀释多少倍才能保证渗透压不受影响？

Eason老歌迷

这个要自己先算好浓度，稀释时可以用培养基，加多少量自己一定要算好。绝大多数细胞对渗透压有一定耐受性。就拿人的来说吧，人的血浆渗透压约为290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。而对比来看，鼠细胞渗透压则是在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg的范围都适宜。

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问细胞污染时都会有哪些现象

天一湖医者

细菌污染特征：大小在0.5~5 μm，比动物细胞小很多。多呈球状或杆状，形态规则，分布均匀；增殖速度快，一般污染后48~72小时爆发式增殖；营养消耗快，培养基很快变黄，变浑浊；镜下观察有明显的定向运动。处理方法：轻度污染可用10X双抗清洗处理，重度污染建议消杀后丢弃。真菌污染特征：呈链球状或丝状。常形成肉眼可见的菌落，培养基颜色无变化或变紫，仅对局部细胞影响较大，其他地方生长正常。会形

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问细胞培养过程中，细胞周围包括细胞上有很多小黑点，怎么办?

Eason老歌迷

看到有小黑点，可以这样做:先要用肉眼去观察培养基是不是混浊。然后在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是不是能游动。如果细胞被污染，微生物则会大量繁殖，培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

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问HEK293细胞或CHO-K1细胞在摇瓶培养

Eason老歌迷

第一，换液时动作要轻。第二，293细胞在低代时容易贴壁，生长良好，在传到几十代以后，易聚集成团，且贴壁不牢，用PBS冲洗时即可能脱落，即使消化后也不容易吹打成单细胞悬液。第三，刚复苏的293贴壁很慢，复苏接种后24小时内,应尽量减少观察细胞次数或不作观察,以免因晃动而影响细胞贴壁。复苏后48小时左右观察贴壁情况并进行首次更换培养基比较合适。

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问DF1细胞张速过快，怎么办？

dxy_dfcqaej4

1.降低细胞密度2.培养基血清降一下

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问提小鼠原代肺成纤维细胞三个月一直是长着长着细胞就死了

Eason老歌迷

你可以试试以下方法：1. 配制0.25%的胰酶，-20度冻存，用时取出，37度水浴温浴。然后将其pH值调至7.0左右，因为胰酶在碱性环境中，消化作用最强。2. 取出细胞把原液倒出，用D-Hanks洗2/3次以去除残留的血清等抑制胰酶消化的因素，加2-3ml经预热的0.25%的胰酶。轻轻晃动瓶子，使瓶中细胞都能接触倒胰酶。倒置显微镜下观察，如果见到细胞变圆，间隙增大（时间约为2分钟）时，倒掉胰酶，用

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问想问下各位大佬：M-CSF诱导小鼠骨髓来源的BMDM，诱导完成后，种板的细胞培养基中还需要给予M-CSF嘛？

bamboopiggy

这个不是加不加MCSF的问题，而是BMDM不可传代，不可用胰酶消化，建议直接铺板，进行诱导，诱导后直接进行实验，不易过长时间培养，会恢复原来的圆形形态。

3 回答1338 围观

问猪肺原代肺巨噬细胞生长速度比较慢，贴壁效果不好怎么办

Eason老歌迷

细胞生长速度慢的解决办法:增加起始培养细胞浓度；换入新鲜配制培养液；补加生长因子；血清需要保存在5℃到20℃，培养液需在2-8℃避光保存；含血清培养液在2-8℃保存，并在2周内用完；要轻轻吹打消化细胞；分离培养物，检测支原体；比较新培养液与原培养液成分，让细胞逐渐适应新培养液。细胞不贴壁:细胞的传代最重要的是胰酶处理时间：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴

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问[求助]肠神经元原代培养

天一湖医者

可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc

4 回答526 围观

问Tunel凋亡和双染测凋亡有什么本质差别吗?

Eason老歌迷

双染法特异性高，简单易行。tunel灵敏度高，但是成本高。最好是配合着用

4 回答117 围观

问iPS细胞在复苏培养的过程中容易遇到的问题有哪些？

天一湖医者

培养细胞不贴壁？悬浮细胞成簇？原代细胞培养物污染？培养细胞死亡等问题。

3 回答178 围观

问请问肿瘤悬浮细胞，最近开始变形长伪足，换了培养基跟血清，我怀疑gibco血清是假的，有所好转，培养基血清会导致细胞这样么？为什么

Eason老歌迷

换了培养基和血清，有所好转，那说明还是和这两个因素有关……

3 回答221 围观

问最近好几次Western blot出来的结果不满意，怎么办呢？

丁冉1234

有可能是曝光液时间久了失效或是条带上沾了太多的曝光液

8 回答409 围观

问MTT测药物对细胞的毒性，测的OD值必须在0-0.7范围内吗？

未来9

一般合适的OD值是在0.1-0.7之间，一般大于1可能就不会不准了

4 回答133 围观

问收集鳟鱼胚胎提取物时，经过胚胎融化、过滤、离心厚，收集到的上清液，怎样稀释到理想蛋白质浓度？

我也是锦鲤ye

测量蛋白质浓度，用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。

3 回答144 围观

问PANC-1细胞为什么看上去长不满

半糖奇朵

可以调整下培养基血清的配比，或者查一下权威文献中该细胞系的培养方法

4 回答79 围观

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