请问如何获得有活性的大肠杆菌OmpF呢

可以考虑以下方法：

1. 细胞提取：从培养好的大肠杆菌中，可以使用细胞破碎技术（如超声波破碎、机械破碎等）将细胞膜破碎并提取外膜蛋白。这可以通过使用适当的细胞破碎缓冲液和条件来实现。

2. 膜片制备：利用超速离心等方法，将提取的细胞膜分离出来。然后可以将细胞膜进行溶解、重悬，形成膜片。

3. 膜片活性检测：使用合适的实验方法（如电生理技术或荧光染色）对膜片的活性进行检测，以确定其中是否含有活性的OmpF。

4. 具体分离和纯化：如果膜片中检测到了OmpF的活性，可以进一步使用分离和纯化技术（如离心、柱层析、电泳等）对OmpF进行提纯，以获得较纯的活性产物。

分离细菌外膜蛋白的方法：

① 于20ml 营养肉汤中过夜培养细菌，37℃，200rpm。

② 10000g、20min、4℃离心，去上清。

③ 20ml预冷的Tris-Mg缓冲液重悬，同样条件离心，再重悬于预冷的Tris-Mg缓冲液。

④ 超声波破碎细菌。

⑤ 3000g，10min、室温下离心去除未破碎细菌。小心吸取上清（含有胞质成分和细菌外被成分）。

⑥ 超速离心I：100,000g，60min，4℃，去除上清（胞质成分），收集细菌外被成分。

⑦ 用10ml含2％的SLS的Tris-Mg 缓冲液重悬沉淀物，室温温育20-30min。

⑧ 超速离心II：70,000g，60min，室温沉淀收集外膜蛋白，去除上清（含细胞质膜）。重复⑦、⑧两步。

⑨ 充分吸除上清，并根据沉淀体积大小用0.1-0.2 ml的ddH2O重悬沉淀物。根据公式：蛋白浓度(mg/ml)=1.450 D280-0.740 D260测定外膜蛋白浓度，调节蛋白浓度至40ug/ul，该蛋白质样品-70℃贮存。

可以通过重组表达的方式获得大肠杆菌外膜蛋白 OmpC和OmpF