基因敲除载体的构建

觉得先将3个目的基因分别双酶切之后用T4 DNA连接酶连接之后再连接到载体上

实验手册上写的是分别酶切再连接，实验老师讲解的时候说可以依次连接，但如果你实验后边还有实验就不建议，会影响后续步骤进行

都可以，看你载体大不大，三个目的基因连一起也可以，但是为了实验的严谨性每一个连载体都可以作为对照

应该是分别将三条基因片段以及载体分别酶切，再用t4连接酶将3条片段分别连接到载体上