pk18mobsacb基因敲除

蔗糖糊板两种可能，第一你去看看自己的菌的全基因组里是否本身就自带SacB的基因，有这个基因，就不能发生第二次重组。第二种情况就是你的第一次重组失败了。如果你的菌野生行都可以在kan上长，那么恭喜你，需要改载体，改成你的菌不抗的抗性再往下做。解决方案:确定自己的菌对哪个抗生素有抗性，而载体上没有的抗性。然后第一次重组用双抗去做。再挑菌，这时候把单克隆挑起来先画蔗糖，同一个枪头，又去再单抗性kan上涂。然后第二天，选择蔗糖上不长的，抗性板上长的。把这些菌全部LB摇，摇了涂板，只要糊板子的都丢了，没有糊的继续培养，后面你就可以做验证了。

这个主要考虑是污染严重导致的。

考虑是有杂质dna污染，先排除一下污染问题在考虑敲除失败