有没有大佬用同源重组法做基因敲除的时候遇到过载体转进去后面没有替换掉目的基因的。

我也遇到过，而且发生几率还比较高，建议更换质粒类型或者重新转。

毕竟是概率问题，题主用的是自杀质粒还是正常质粒？看看同源臂的长度和设计有没有什么问题，都没问题就多做看运气了，有些宿主确实不好敲

同源重组法做基因敲除时，遇到载体没有替换掉目的基因的情况是比较常见的。

一个可能的原因是载体和目的基因之间没有足够的同源性。在这种情况下，重组可能发生在目的基因外的其他地方，不能造成敲除。

另一个可能的原因是载体转换率太低，没有足够的载体进入细胞并进行重组。

如果遇到这样的情况，可以考虑以下方法：

增加同源性：通过增加同源性来增加重组的概率。

增加转换率：通过增加载体转换率来增加重组的概率。

改变重组方法：使用其他重组方法来实现敲除。例如，CRISPR-Cas9系统是一种高效的基因敲除方法。

希望这些建议对你有所帮助。