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科研学霸天团，48小时有问必答
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问
免疫组化，中间和边缘染色深浅不一，什么原因呢！
Eason老歌迷
有可能是你蜡圈画的太小，显色液覆盖的面积不过大而产生了边缘效应。最外侧的组织片最好离显色液外缘0.5 cm。
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问
免疫组化，抗原阳性检测率及着色很弱，什么原因呢？
Eason老歌迷
你可以先确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。检查标本的储存条件，最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。
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问
免疫组化，组织出现异染，什么原因呢？
Eason老歌迷
有可能是抗体的问题，比如说用了非特异性抗体，也可能是苏木素染的不好。
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问
免疫组化，热抗原修复操作时容易脱片，什么原因？
balalaLy
抗原修复缓冲液ph不合适也容易脱片
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问
免疫组化，蜡块出现组织收缩凹陷，怎么解决呢？
Eason老歌迷
一个是梯度酒精脱水尽量彻底充分。二是二甲苯透明时间不宜长，1～3h为佳，透明过度会导致组织发硬发脆。三个是浸蜡应选择低熔点的石蜡，浸蜡应充分。
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问
BALB/C小鼠背部皮下注射漏液，如何解决呀
bamboopiggy
注射前，先把注射部位的皮肤稍微拽起来一点，然后注射到拽起的皮肤下面
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问
卵泡计数，HE染色连续切片怎么数呢？
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问
实验的选择 雄鼠？雌鼠的选择？
府宅
SD大鼠: 生长快，繁育性能好，大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。 该品系对性激素敏感，对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。一般生物学特性繁殖性能：产仔率：92～95％ ；平均窝产仔数：9.96～12.07只 ；胎间隔：28～52天；离乳存活率：95～98％。Wistar大鼠 ：Wistar大鼠由美国费城Wistar研究所育成。常用的既有近交系，也有远交群
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问
大鼠IVF有人做过吗，受精率很低就一两个胚胎发育2-cell后续就卵裂了？有大佬做成功过吗？
你好几和户
不好成功，大鼠IVF精子存活时间较长，精子的存活时间较短，胚胎可以发育到囊胚（64~128-cell）胚胎有2-cell阻滞现象细，胞不易死亡，IVF容易畸形，且第二天2-cell容易死亡。
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想问问有没有朋友做过真菌的流式，非孢子
Eason老歌迷
是可行的，你可以看看这篇文章，”流式细胞仪和流式细胞仪应用于丝状真菌”
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问
流式测凋亡方法的区别？
balalaLy
tunel法容易有假阳性，做免疫荧光比较多，另外两个做流式比较多
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问
流式细胞如何分析平均荧光强度？
Eason老歌迷
可以利用软件啊，打开FloJo,显示工作台。找到原始数据(fcs 格式文件) Ctrl+A 将所有文件全选,鼠标将其直接拖到 All Samples 中。针对数据一进行分析：鼠标左键点击 fcs 格式数据出现流式散点图,X 轴默认选择 SSC(侧向散射,其散射强度与细胞内颗粒结构的质量正相关,即细胞圈门。对圈出细胞进行分析，双击 Lymphocytes 选中这群细胞，根据实验目的、染料所需的荧光激
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问
流式细胞如何调补偿？
Eason老歌迷
流式细胞术中荧光补偿该如何调节？以FITC和PE为例来看光谱重叠。FITC单染管的荧光会部分漏到PE通道中，而这部分需要从PE通道中减掉溢漏过来的FITC荧光。那么荧光补偿该如何调节呢？l调节电压l检测荧光通道的自发荧光l每个荧光通道做单染管对照检测何为单染管对照？l细胞l补偿微球细胞通常是流式抗体单染管对照的样本shou选，但是当细胞数量有限，无多余细胞用于抗体单染或感兴趣的表面抗原表达较低，阳
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问
TNBS灌肠后大鼠死亡，DAI评分这只大鼠是剔除还是算满分？
Eason老歌迷
灌肠后大鼠死亡了，肯定是要剔除的啊。
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问
培养皿培养的细胞，想做成细胞蜡块，有没有好的方法，需要多少量的细胞
balalaLy
细胞肯定是越多越好，至少要7次方
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问
成纤维细胞和平滑肌细胞做组化用什么marker区分呢，有无推荐？求助大佬们┭┮﹏┭┮
Eason老歌迷
可以考虑Vomentin，HsP47，S100A4，alpha smooth muscle actin。
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问
免疫组化过程中，DAB显色后发现切片着色不均匀，如一片着色，另一片不着色或染色浅？
Eason老歌迷
还是没有切好，组织切的不好，切片机的问题例如比较老的旧的机器切的厚或者不均匀，或者切片者手法不好等。
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问
救急，裸鼠皮肤出现什么问题了
bamboopiggy
感觉是小鼠的屁股不知道在什么地方磨过了。但是又左右对称，应该是就长这样吧。
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问
肺癌细胞造的转移模型，用什么抗体指标做免疫组化还是免疫荧光可以确定转移部位的细胞
你好几和户
F1，TTF1阳性代表的是肺来源，KI67是主要看增长指数，其他HER2，KRAS或者P53、CK都证明来源。
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问
CDX-Hep3B，有人做过吗？
bamboopiggy
hep3B是肝癌细胞系，可能这个细胞系促血管生成，所以成的瘤都是血，你需要换个细胞系做了。
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