请问使用流式细胞仪前 需要对样品做什么前期处理呢，比如说剪盖是什么操作 过滤等有什么操作技巧么

1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min，收集沉淀。

3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。

4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。

流式检测细胞周期与凋亡样品处理流程

1胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液21000r/min离心5min，收集沉淀。

3.沉淀用PBS洗2次，1000r/min离心5min，收集沉淀。

4.细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。

备注:1每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散，避免细胞聚集)

细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

流式检测细胞 DNA 倍体样品处理流程

1.胰蛋白酶消化法收集细胞，做成单细胞悬液

2.1000r/min离心5min，收集沉淀。

3沉淀用PBS洗2次，加入相应种属的淋巴细胞或鸡红细胞做为内参，内参与

预检测细胞的比例为1:3

4.1000r/min离心5min，收集沉淀。

5细胞沉淀用4℃预冷的70%的冰乙醇1ml重悬，4℃过夜。即可送检。

备注:1每个细胞样品细胞量需达到106(细胞沉淀要打散，避免细胞聚集)

细胞量少可能测不出结果，或结果不太准确。

2.样品可在-20℃保存一个月

检测胞内蛋白上机前细胞处理流程

1收集实验处理好的细胞，用PBS洗2次，2%多聚甲醛固定15min。2离心弃掉多聚甲醛，再用70%的冰乙醇固定过夜(4℃)。

3离心弃掉乙醇，PBS洗一遍，加破膜剂0.5%TritonX-10050ul/106个细胞

15min。

4直接在0.5%TritonX-100中加一抗室温孵育30min，离心，用PBS洗一次，

加荧光标记二抗(需进口二抗国内的效价比较低效果不好)，总体系为100ul，总体系中应含0.25%(体积数)的TritonX-100，室温孵育30min。

5也可以直接加FITC直标的一抗。

6.离心，用PBS洗一次，用2%的多聚甲醛固定，4℃存放待测。

流式细胞仪上机前样品的准备

样本的制备：

1、细胞需悬浮于培养基或 PBS 中（含1％的血清或0.5％的 BSA )；上机前需用200目筛网过滤细胞，为了避免细胞粘连，可以添加1mmol / LEDTA

2、如果分选后的细胞用于继续培养，需确保样本无菌，可适量添加抗生素。

3、推荐样品体积为200-500uL。用于分析的样品推荐浓度为0.5-5x10%cells/ mL ，用于分选的样本推荐浓度为106-107cells/ mL 。为提高分选的速率，可以先准备尽量浓的样本（大于107cells/ mL )，上机后根据分选效率再用培养基或缓冲液稀释成合适的浓度。

分选需准备的材料：

1、接收细胞的液体：完全培养基、血清、适合细胞存活的自制缓冲液、裂解液。

2、接收的容器：1.5mL Eppendorf 管（至少加入100μ L 液体）、5ml BD Falcon 352054流式管（至少加入1mL液体）、15mL离心管（至少加入2 mL 液体）、96孔培养板（加入100uL培养基）、 PCR 管（板）（加入4-10uL预扩增液）。

3、每次上机需要准备空白对照（未染色的样本）、同型对照和每一种荧光通道的单染样品来调节电压和补偿（在其他仪器上获取的电压值和补偿值不通用）；为了圈门精确及验证实验，用户可以准备 FMO 对照和阳性对照。

4、用户可以在分析（选）前把其他仪器上的流式图发给工作人员，为分析（选）做更充分的准备。

5、使用96孔 PCR 板接收单细胞的用户需要携带未使用的96孔 PCR 板及透明的封板膜。

1. 剪盖：

- 使用无菌剪刀或刀片，将细胞培养皿或培养瓶的盖子剪开。

- 在剪切之前，确保工作区域和工具都是无菌的，以避免细菌或其他污染物的进入。

- 剪切时要小心，避免将剪刀或刀片接触到培养物，以防止污染。

2. 过滤：

- 使用无菌滤纸或过滤器，将细胞悬液过滤到一个新的容器中。

- 在过滤之前，确保过滤器是无菌的，并将其放置在无菌的过滤器架上。

- 将细胞悬液倒入过滤器中，让液体通过滤纸或过滤器，以去除细胞团块和杂质。