流式区分死活细胞

DAPI和PI都是DNA染料，可以用来区分死活细胞。

死细胞的质膜完整性受损，导致DNA染料可以进入细胞核并与DNA结合，发出荧光信号。

活细胞的质膜完整性正常，阻止DNA染料进入细胞核，因此不会发出荧光信号。

如果你想用DAP或PI区分死活细胞，你应该先进行固定再进行染色。

如果你先染色再固定，会导致所有的细胞都发生渗透性增高，结果就是所有的细胞都染上色以至于无法区分死活细胞。

如果你需要检测胞内抗原而不得不破膜的标本中，这时就没法用DAP或P1来区分死细胞了。

这时候你可以考虑使用蛋白结合染料来区分死活细胞。

蛋白结合染料可以与质膜上的氨基反应，并且对固定没有敏感性。

是的，这样操作会导致所有的细胞都染上色而无法区分死活细胞。

流式细胞仪法用来判断细胞死活的常用荧光探针有二大类：一类是能透过活的细胞膜进入细胞内而发出荧光的物质,例如FDA可被活细胞持留而发出黄绿色荧光,若细胞有损伤则会从细胞中流失,观察不到荧光.另一类是不能透过活细胞膜,但能对固定的细胞及膜有破损的细胞的核进行染色,例如碘化丙啶（ PI,Propidium iodide ）和溴化乙锭（ EB,Ethidium bromide ）就是常用的第二类荧光探针.碘化丙啶(PI)不能穿透细胞膜,对于具有完整细胞膜的正常细胞或凋亡细胞不能染色.而对于坏死细胞,其细胞膜的完整性丧失,碘化丙啶(PI)可以染色坏死细胞.目前常用的一种细胞凋亡与坏死检测试剂盒则含有Hoechst 33342和碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)两种荧光染料.细胞发生凋亡时,染色质会固缩,Hoechst 33342可以穿透细胞膜,染色后凋亡细胞荧光会比正常细胞明显增强.上述两种染料双染后,使用流式细胞仪或荧光显微镜检测时,正常细胞为弱红色荧光＋弱蓝色荧光,凋亡细胞为弱红色荧光＋强蓝色荧光,坏死细胞为强红色荧光＋强蓝色荧光。

可以先染DAPI或PI，再进行固定。