流式细胞术应用 | 自然水体中病毒细菌区分
丁香园
4919
实验简介
自然水体中病毒、细菌的含量通常可作为水质的评判指标。近年来，借助流式细胞仪对自然水样进行病毒、细菌的鉴别与计数已经成为很多科研工作者研究的热点。
本实验用核酸染料 SYBR green I 对自然水样进行染色，借助 CytoFLEX 流式细胞仪检测，区分水体中所含的病毒与细菌，与传统的显微镜计数及平板菌落计数法等相比，具有速度快，操作简便，结果准确的优点。
材料与方法
▶ 试剂
▶ 样品制备
| Sample Type | 自然水体 |
| Species | |
| Age of specimen | 新鲜样本 |
| Prep Method | 1. 配置 Tris-EDTA buffer（TE，pH=7.5）； 2. 以 SYBR green I 染色的 TE 溶液 为对照设定阈值； 3. 以 SYBR green I 染色的噬藻体界定病毒的大体位置，以 SYBR green I 染色的大肠杆菌界定细菌的大体位置； 4. 检测 SYBR green I 染色的湖水样本中病毒与细菌的含量。 |
▶ 仪器配置
| Instrument Configuration | VSSC (Yes/No) | Plate or Tube Format |
| B5-R3-V5 | Yes | Tube |
数据分析
1. 建立 FSC/VSSC-Log 双参数散点图，SYBR /VSSC-Log 散点图用于区分病毒与细菌；
2. 将阈值设定在 SYBR 通道，以 SYBR green I 染色的 TE-buffer 作为对照，界定阈值将杂信号去掉；
3. 以 SYBR green I 染色的噬藻体界定病毒的大体位置，以 SYBR green I 染色的大肠杆菌界定细菌的大体位置；
4. 检测自然水样中病毒和细菌的含量。
实验结果
CytoFLEX 是第一台借助 VSSC 可检测 100nm 微颗粒的流式细胞仪，在本次实验中 CytoFLEX 流式细胞仪可通过荧光信号和 VSSC 对自然样本中的不同病毒和细菌进行区分，并对各种类型的病毒和细菌进行自动计数，操作简单，计数准确，减少了人力，降低了检测成本。
