流式细胞术应用 | 自然水体中病毒细菌区分

实验简介

自然水体中病毒、细菌的含量通常可作为水质的评判指标。近年来，借助流式细胞仪对自然水样进行病毒、细菌的鉴别与计数已经成为很多科研工作者研究的热点。

本实验用核酸染料 SYBR green I 对自然水样进行染色，借助 CytoFLEX 流式细胞仪检测，区分水体中所含的病毒与细菌，与传统的显微镜计数及平板菌落计数法等相比，具有速度快，操作简便，结果准确的优点。

材料与方法

▶ 试剂

▶ 样品制备

Sample Type	自然水体
Species
Age of specimen	新鲜样本
Prep Method	1. 配置 Tris-EDTA buffer（TE，pH=7.5）； 2. 以 SYBR green I 染色的 TE 溶液 为对照设定阈值； 3. 以 SYBR green I 染色的噬藻体界定病毒的大体位置，以 SYBR green I 染色的大肠杆菌界定细菌的大体位置； 4. 检测 SYBR green I 染色的湖水样本中病毒与细菌的含量。

▶ 仪器配置

Instrument Configuration	VSSC (Yes/No)	Plate or Tube Format
B5-R3-V5	Yes	Tube

数据分析

1. 建立 FSC/VSSC-Log 双参数散点图，SYBR /VSSC-Log 散点图用于区分病毒与细菌；

2. 将阈值设定在 SYBR 通道，以 SYBR green I 染色的 TE-buffer 作为对照，界定阈值将杂信号去掉；

3. 以 SYBR green I 染色的噬藻体界定病毒的大体位置，以 SYBR green I 染色的大肠杆菌界定细菌的大体位置；

4. 检测自然水样中病毒和细菌的含量。

实验结果

CytoFLEX 是第一台借助 VSSC 可检测 100nm 微颗粒的流式细胞仪，在本次实验中 CytoFLEX 流式细胞仪可通过荧光信号和 VSSC 对自然样本中的不同病毒和细菌进行区分，并对各种类型的病毒和细菌进行自动计数，操作简单，计数准确，减少了人力，降低了检测成本。

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