简介
流式细胞仪的特征：1. 灵敏度高 ；2. 速度快；3. 多参数分析（可同时标记多种荧光素）；4. 单细胞水平上的分析；5. 需要样本量少；6. 出结果快；7.标本来源广。
原理
制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法）
↓
用 10％ FCS RPMI-1640 调整细胞浓度为 5×106～1×107/ml
↓
取 40 ul 细胞悬液加入预先有特异性 McAb（5～50 ul）的小玻璃管或塑料离心管，再加 50 ul 1:20（用 DPBS
稀释）灭活正常兔血清
↓ 4℃ 30 min
洗涤 2 次，每次加洗涤液 2 ml 左右，1000 rpm × 5 min
↓
弃上清，加入 50 ul 工作浓度的羊抗鼠（或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇
↓ 4℃ 30min
用洗涤液洗涤 2 次，每次加液 2 ml 左右，1000 rpm × 5 min
↓
加适量固定液（如为 FCM 制备标本，一般加入 1 ml 固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，
视细胞浓度加入 100～500 ul 固定液）
↓
FCM 检测或制片后荧光显微镜下观察（标本在试管中可保存 5～7 天）
材料与仪器
【样品】细胞悬液；
【试剂】羊抗鼠荧光标记物、DPBS、洗涤液、固定液、甲醛、葡萄糖、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾；
【仪器与耗材】玻璃管、离心管、荧光显微镜、离心机；
步骤
制备活性高的细胞悬液（培养细胞系、外周血单个核细胞、胸腺细胞、脾细胞等均可用于本法）
↓
用 10％ FCS RPMI-1640 调整细胞浓度为 5×106～1×107/ml
↓
取 40 ul 细胞悬液加入预先有特异性 McAb（5～50 ul）的小玻璃管或塑料离心管，再加 50 ul 1:20（用 DPBS
稀释）灭活正常兔血清
↓ 4℃ 30 min
洗涤 2 次，每次加洗涤液 2 ml 左右，1000 rpm × 5 min
↓
弃上清，加入 50 ul 工作浓度的羊抗鼠（或兔抗鼠）荧光标记物，充分振摇
↓ 4℃ 30min
用洗涤液洗涤 2 次，每次加液 2 ml 左右，1000 rpm × 5 min
↓
加适量固定液（如为 FCM 制备标本，一般加入 1 ml 固定液，如制片后在荧光显微镜下观察，
视细胞浓度加入 100～500 ul 固定液）
↓
FCM 检测或制片后荧光显微镜下观察（标本在试管中可保存 5～7 天）
注意事项
1、整个操作在 4℃ 下进行，洗涤液中加有比常规防腐剂量高 10 倍的 NaN3，上述实验条件是防止一抗结合细胞膜抗原后发生交联、脱落。
2、洗涤要充分，以避免游离抗体封闭二抗与细胞膜上一抗相结合，出现假阴性。
3、加适量正常兔血清可封闭某些细胞表面免疫球蛋白 Fc 受体，降低和防止非特异性染色。
4、细胞活性要好，否则易发生非特异性荧光染色。
来源：丁香实验
