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SLC7A11过表达求助

相关实验:基因过表达构建实验

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皮卡丘1996

各位老师

我按照2μg、4μg、6μg的量依次梯度转染293T细胞,但是一直不成功,看不到什么趋势。此外我看到这个分子有两条带,应该看哪一条呢?在这里我看的是40kDa的那一条。

后面三个泳道,梯度转染SLC7A11-3×flag,2、4、6μg

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2 个回答

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汤姆卜丽波

有帮助

你做了QPCR过表达确实是成功了么,然后转染时间,细胞密度尽量保持一致,看40的条带

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loveliufudan

有帮助

有以下几点建议:

1. SLC7A11在40kDa处显示条带,这与该蛋白的理论分子量相符,应优先检查这一条带。

2. 梯度转染未见明显升高趋势,可能是转染效率不一致造成的。您可以检测转染对照来评估转染效率。

3. 考虑再扩大转染剂量范围,例如0、2、4、6、8μg,并配对空载体计量,可能更能看出趋势。

4. 确保所用抗体的特异性良好,避免检测非特异性条带。可以做抗体阻断实验或阳性对照验证。

5. 检查转染细胞的裂解和上样量是否均匀一致。上样均匀非常重要。

6. 优化暴露时间,获得条带信号但不过曝。

7. 重复试验,增加技术重复,结果更可靠。

8. 如果可能,可以做荧光定量PCR验证mRNA水平升高。

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