外泌体wb鉴定CD63和TSG101条带反白是啥原因？救救孩子

请问解决了吗？我之前也是这样，后来我把一抗浓度降低，比如说我的抗体适合浓度为1:500-1:3000之间，我把一抗浓度直接拉到1:450左右，二抗浓度1:7000，调带就跑出来

原因:中心部位高浓度HRP把底物消耗过快,中间部位底物消耗结束之后就不发光了。 解决办法:降低蛋白量,降低一抗和二抗的浓度。

1.二抗孵育时间过长，一小时即可2.目的蛋白上样量过高；

原因：蛋白上样量过大或HRP过多；处理对策：减少蛋白上样量，或增大二抗稀释比例，二抗可以稀释到1:10000都没问题