外泌体超滤管选择

使用100Kd超滤管浓缩细胞上清保留内管液体。

我师兄发明的一种提取外泌体方法。如下:用含无外泌体血清的培养基培养细胞得到培养上清液，所述培养上清液中含有外泌体。进行第一离心处理后，取上清进行第二离心处理，然后取上清得到离心液；将所述离心液用100kd超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将所述超滤液进行第三离心处理后，用0.22μm过滤器进行过滤除菌处理，得到浓缩液；将所述浓缩液进行第四离心处理，弃上清得到所述外泌体。

其中，所述第一离心处理的离心力为600-1000g，所述第二离心处理的离心力为2000-2800g，所述第三离心处理的离心力为9000-11000g，所述第四离心处理的离心力为90000-110000g。

先用含无外泌体血清的培养基对人脂肪来源间充质干细胞进行饥饿培养，这样可使干细胞处于正常生长状态，不会被抑制生长增殖，其所分泌的外泌体所包含的有效物质也更贴近其自然状态下的外泌体，然后将含有外泌体的培养上清液进行低速差速离心(即先第一离心处理、再第二离心处理)以去除细胞及其碎片，用100kd超滤管对低速差速离心后的离心液进行超滤浓缩得到外泌体浓度更高的超滤液，将超滤液经过第三离心处理去除杂质后直接用0.22μm过滤器过滤除菌，过滤掉粒径为220nm以上的物质，进一步得到含颗粒粒径小于220nm的浓缩液，因超滤浓缩处理和第三离心处理使得液体量浓缩，这样过滤除菌效率得到大大提高，最后将浓缩液进行超速离心的第四离心处理分离提取到外泌体。

都说是浓缩了，当然保留的是管内的液体。

一种外泌体的提取方法，包括如下步骤：用含无外泌体血清的培养基培养人脂肪来源间充质干细胞，得到培养上清液，所述培养上清液中含有外泌体；将所述培养上清液进行第一离心处理后，取上清进行第二离心处理，然后取上清得到离心液；将所述离心液用100KD超滤管进行超滤浓缩处理，得到超滤液；将所述超滤液进行第三离心处理后，用0.22μm过滤器进行过滤除菌处理，得到浓缩液；将所述浓缩液进行第四离心处理，弃上清得到所述外泌体。