boommi
想请教各位大神,现在我有未加药组、加药组1和加药组2,我想上机流式测细胞凋亡,在设置空白管和单染管时,可不可以只用未加药组来进行单染并调节荧光补偿?还是说这3个组每个组都弄个单染管呢?
土井挞克树
loveliufudan
在设置空白管和单染管时,有以下几点建议:
单阳管即单染管,是只添加一种荧光抗体的样本管。一般来说,实验panel有几种荧光,就需要设置几个单阳管。例如:APC、PE、FITC的三色panel,需要设置三个单阳管。
单阳管和全染管的样本类型、荧光素要保持一致;单阳管和全染管的样本处理要相同;单阳管上机的电压要和全染管保持一致;单阳管要保证有足够的阳性细胞群。
如果目标marker表达量高,阴阳细胞分群明显,也需要设置单阳管。如果panel的指标少,可以不用设单阳管,通过手动调节补偿,将细胞调整到横平竖直的状态即可。但是,如果panel的指标比较多,就必须都设置单阳管。
如果你的样本丰度比较低,或者有些marker表达量很弱,可以使用补偿微球代替细胞来制备单染管。补偿微球是聚苯乙烯微粒,用于优化荧光补偿设置。一般有阴性珠子和阳性珠子。充分混合后和抗体孵育,将得到阴性和阳性群比例一定的单染管。
z流沙z
其实需要的是处理组来做单染,其中一个处理组就可以