不同浓度竟争模板和控制混合液的配制

（1）不同浓度的竞争模板和控制混合液的配制，(每管体积均为10μl)；

（2） 标准混合液的制备：GM―CSF上游引物(5nmol/ml)48μl，GM―CSF下游引物48μl，dNTP贮备液(2.5mmol/L 每种浓度)96μl，(GM―CSF　cDNA(0.6μg/μl 12μl)，1 0×PCR缓冲液120μl，Taq DNA聚合酶(5 U/μl)1.2μl，双蒸水756μl；

（3） 向竞争模板GM-cSF 1#～11#管中加入90μl上述混合液；

（4） PCR进行40个循环,参数为94℃ 1min，62℃ 1min,72℃ 2min；

（5） 取反应液各20μl，一式三份，在2.5％琼脂糖凝胶中电泳分析；

（6） 测定每管中(gGM)和cGM的含量,以密度计对电泳胶片进行分析测定；

（7） GM―CSF/GM―CSF cDNA对已知竞争GM―CSF量的函数作图。在比例为1:1的等值点处cGM=gGM。据此，可判断未知cDNA的浓度。