测序模板的快速纯化
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测序模板的快速纯化
【材料和试剂】
（1）真空泵
（2）PEG/NaCl溶液
（3）碘化物缓冲液
（4）70%乙醇
（5）TE缓冲液
10mM Tris-HCl，pH 8.0；
1mM EDTA
【操作步骤】
（1）扩增噬斑（见上述），在第一次离心后，将500ml含有噬菌体的上清转入新的离心管中。
（2）加入200ml PEG/NaCl，颠倒混匀，室温静置10min。
（3）离心10min，倾去上清。
（4）再次短暂离心，仔细吸去残留上清。
（5）用100ml碘化物缓冲液完全重悬沉淀物，加入250ml乙醇。室温孵育10min，室温短暂孵育将选择性沉淀单链噬菌体DNA，而大部分噬菌体蛋白保留在溶液中。
（6）离心10min，倾去上清，用70%乙醇洗涤沉淀物，真空吸干。
（7）用30ml TE缓冲液重悬沉淀物。
（8）取5ml作为测序模板，或根据需要增减。
