材料与仪器
甲酰胺 核酸 寡核苷酸
ABI PRISM 3100Genetic Analyzer 微量离心管 DTR Gel Filtration Cartridges (Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪
ABI PRISM 3100Genetic Analyzer 微量离心管 DTR Gel Filtration Cartridges (Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪
步骤
一、材料
1.缓冲液和溶液
样品上样液
所用的样品上样液取决于所用的设备。对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,推荐使用高度脱离子
的甲酰胺(如ABI的Hi-Di-甲酰胺)。
2.核酸和寡核苷酸
在方案3中二、方法、步骤5得到的测序反应产物
3.特殊设备
ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,微量离心管,DTR Gel Filtration Cartridges(Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪
二、方法
1.从包装袋中取出所需数目的组装好的圆筒,仔细检査,确保圆筒中板模没有干,如果管中已经没有多余的液体或是板模已干,加入200ul去离子水,使板模重新水合几分钟。
2.将圆筒放于微董离心管中,1360g离心2min(如在采用固定倾角转子的Eppendorf5415C中4000r/min)。这一步是必需的,否則圆简中会加入多余水分.
3.取出圆筒,放置到另一个干净的管中,小心将样品加入到板模的中间。
4.将圆筒放回到离心机,保持与第一次离心相同的方向,1360g离心1~1.5min。
较短的离心时间则回收率较低,一般为75%~85%,但几乎可以完全去除没有结合的染料.较长的离心时间虽然可提高回收率(95%),但是洗脱物中会混有终止染料,导致引物附近的碱基含混不清。
5.洗脱物可在-20°C冻存,也可以用自动测序仪立即分析。
6.在其空浓缩仪中浓缩洗脱物20~30min,不要加热,由于染料是光敏感的,浓缩时间不宜过长,否则可能导致降解。
7.按照测序仪的说明书,用10ul的上样缓冲液重悬样品,上样董取决于所使用的测序仪,对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer而言,每个毛细管加1~l.5ul即可。
8.按照测序仪说明书进行电泳分离和样品分析。
1.缓冲液和溶液
样品上样液
所用的样品上样液取决于所用的设备。对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,推荐使用高度脱离子
的甲酰胺(如ABI的Hi-Di-甲酰胺)。
2.核酸和寡核苷酸
在方案3中二、方法、步骤5得到的测序反应产物
3.特殊设备
ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,微量离心管,DTR Gel Filtration Cartridges(Edge Biosystems)或相应的真空浓缩仪
二、方法
1.从包装袋中取出所需数目的组装好的圆筒,仔细检査,确保圆筒中板模没有干,如果管中已经没有多余的液体或是板模已干,加入200ul去离子水,使板模重新水合几分钟。
2.将圆筒放于微董离心管中,1360g离心2min(如在采用固定倾角转子的Eppendorf5415C中4000r/min)。这一步是必需的,否則圆简中会加入多余水分.
3.取出圆筒,放置到另一个干净的管中,小心将样品加入到板模的中间。
4.将圆筒放回到离心机,保持与第一次离心相同的方向,1360g离心1~1.5min。
较短的离心时间则回收率较低,一般为75%~85%,但几乎可以完全去除没有结合的染料.较长的离心时间虽然可提高回收率(95%),但是洗脱物中会混有终止染料,导致引物附近的碱基含混不清。
5.洗脱物可在-20°C冻存,也可以用自动测序仪立即分析。
6.在其空浓缩仪中浓缩洗脱物20~30min,不要加热,由于染料是光敏感的,浓缩时间不宜过长,否则可能导致降解。
7.按照测序仪的说明书,用10ul的上样缓冲液重悬样品,上样董取决于所使用的测序仪,对于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer而言,每个毛细管加1~l.5ul即可。
8.按照测序仪说明书进行电泳分离和样品分析。
来源:丁香实验