各位大神，WB玄学请教：

是不是提取的外泌体蛋白已经部分溶解，另外电泳的时间有没有可能不够长

蛋白不纯，导致用不同抗体时出现杂带，而在同一部位出现

可能出现杂带，当杂蛋白含量高到一定程度，“任何”一种一抗都可以在该位置显出条带。

可能是使用的不同一抗在免疫印迹实验中的特异性不同，导致它们交叉识别了同一条蛋白质，使得多个蛋白质的条带位置在免疫印迹中重叠到了一起。此外，不同的一抗可能具有不同的灵敏度，可能导致某些蛋白质的信号比其他蛋白质的信号更强，因此在较高的分子量区域产生重叠的效果。

为了解决这个问题，你可以尝试使用更为特异的一抗或者调整蛋白质的量，以便产生更清晰的条带。此外，你可以尝试进行多通道免疫印迹实验，以便在同一膜上同时检测多个蛋白质并避免条带重叠的问题。

考虑体系中有混合，由于你使用不同的一抗没有对照组，所以只能推测，无法确定具体原因。