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我用pET32a载体,酶切位点EcoRI和XhoI,目的片段长度1326bp(没有终止子),诱导之后跑了胶,如下图:
1:Marker,
2:32a空载诱前;
3:32a空载30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;
4:重组载体诱前;
5:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;
6:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声上清;
7:重组载体30℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声沉淀;
8:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后;
9:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声上清;
10:重组载体20℃,0.5mMIPTG,220rpm,诱后超声沉淀;
图片中显示,诱导后,上清中有条带吗?我目前不能确定。而且在诱后超声沉淀中,包涵体居多,出现了两个条带,我判断的是位于上面的那一条是我做的目的蛋白,下面一条是什么?我判断的对吗?大家可以看下吗?
Eason老歌迷
也有可能是分子伴侣。也可以你的目的蛋白有降解了。
bamboopiggy
27bp=1kd,所以你那个1326bp 大概是50kd,就是加上histag的18个bp,也没有到70啊
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