用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办？

dxy_1fxesk12

2022-06-21

我用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞纯化蛋白（载体是pet-28a，加的组氨酸标签），在超声破碎的过程中，发现无论处理多长时间，菌液都是浑浊的，做了电泳发现目的蛋白都在沉淀中，求大神解答！谢谢🙏！

迟C迟

2022-06-22

有帮助

可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。

天一湖医者

2022-06-22

有帮助

换标签试试，可以换gst标签试试。

bamboopiggy

2022-06-21

有帮助

包涵体内的蛋白是非折叠状态的聚集体，不具有生物学活性，因此要获得具有生物学活性的蛋白质必须将包涵体溶解，释放出其中的蛋白质，并进行蛋白质的复性。

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