本人纯化his标签蛋白，无论如何更换表达感受态和诱导条件，蛋白表达量都很低是什么原因？使用载体为32a，和28a都不理想

我也不知道Z2ZO

2022-03-22

天一湖医者

2022-03-22

有帮助

a可能原因：超声功率不合适(太大，蛋白碳化，太小，蛋白没完全释放)

解决方法：改变超声功率或者其它方法破碎细胞。

b.样品或缓冲液不合适

解决方法：确保缓冲液中螯合剂，还原剂，咪唑浓度不是很高。

c.His标签暴露不完全

解决方法：在缓冲液中加变性剂(4-8M尿素，4-6M盐酸胍)，然后用IMAC介质纯化。

d.His标签丢失

解决方法：必要时增加His的个数并确保正确表达，同时降低上样速度，确保足够的孵育时间。

whilt-shirt

2022-03-22

有帮助

建议测序检查,或尝试更换表达载体。

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