组织铺片免疫荧光，鬼笔环肽染factin，只有中间一部分染上了，请教大家 讨论一下什么原因呢？

第一有可能是玻片材质问题的影响。第二也有可能自身操作不规范染色过程中漏掉了某个环节。第三有可能是组织自身抗原表达问题

只中间染上周围没有上色是因为抗体太少在片子上没有铺均匀。染的时候注意平铺在表面，最好摇床过夜。

部分染色部分没染色可能是切片厚薄不均的原因，厚的地方没有染上色

两种可能：1、真阴性结果：整个染色过程没有出现问题，组织或细胞确实不表达与抗体相关的抗原。2、假阴性结果：即此阴性结果不是真实的反映。染色过程中的某一或某些环节出了问题。比如，组织未进行抗原修复，有的组织必须经过抗原修复才能检测抗原表达；或选用了只能用于冰冻组织而不能用于石蜡包埋组织的抗体；或一抗失效，虽然抗体失效在理论上是一个逐渐的过程，但偶尔也遇到突然失效的情况，抗体长期不用和/或已超过有效期是主要的原因。也可见于染色过程中漏掉了某一环节，如忘记加二抗或三抗，或用了两次二抗而缺少了三抗，或配制DAB时少了过氧化氢。