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(1)新鲜干燥血片于95%乙醇中固定10min,蒸馏水冲洗数次,待干。
(2)浸入10g/L过碘酸水溶液中10min,蒸馏水冲洗数次,待完全干燥。
(3)放入雪夫液30min,用自来水冲洗约5min,再用蒸馏水冲洗,然后用20g/L甲基绿复染20min,水洗,晾干。
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(1)将切片于95%乙醇中固定10min,蒸馏水冲洗数次,待干。
(2)浸入10g/L过碘酸水溶液中10min,蒸馏水冲洗数次,待完全干燥。
(3)放入雪夫液30min,用自来水冲洗约5min,再用蒸馏水冲洗,然后用20g/L甲基绿复染20min,水洗,晾干。
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视网膜血管的糖原染色可以使用PAS(Periodic Acid-Schiff)染色方法。下面是一般的步骤:
1. 固定组织:将已消化出来的视网膜血管固定在适当的固定剂中,如4%的中性缓冲福尔马林。
2. 脱水和包埋:将固定的组织进行脱水处理,逐渐使用不同浓度的乙醇,然后使用透明剂如苯并丙酮进行包埋,以便组织能够被切片。
3. 切片:将包埋的组织切成薄片,厚度通常为4-6微米。
4. 上染剂处理:将切片放在含有0.5%的周期酸溶液中,室温孵育10分钟,然后用去离子水洗涤。
5. Schiff试剂处理:将切片转移到Schiff试剂中,室温下孵育15-30分钟。
6. 去色:将切片用去离子水洗涤,以去除未结合的Schiff试剂。
7. 染色对比:使用染色对比剂如核素深蓝染色剂,浸泡切片数秒钟,然后用去离子水洗涤。
8. 封片:将切片用透明介质如mounting medium封盖,然后用玻璃盖片覆盖。
注意事项:
• 在整个过程中,使用无菌技术和无菌器具,以防止污染。
• 操作过程中避免切片的过度干燥,以免影响染色结果。
• 染色时间可以根据需要进行调整,但不要超过推荐的时间范围。