【交流】如何做出你满意的ELISPOT?
丁香园论坛
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关于ELISPOT试剂盒:
用Mabteck公司的ALP标记抗体吧,配合Millipore公司的Multiscreen-IP 96孔板,所有的试剂都可以减半,照样可以出非常好的结果,undefined96孔的试剂盒我一直做undefined96孔,但BCIP/NBT显色液没试过减半,因为它很便宜。记得当年第一次做实验就出了很好的结果,经过不断摸索,做出的蓝紫色斑点确实非常漂亮,几乎没有非特异斑点,嗯,ELISPOT是我最拿手的实验之一。
关于PBMC:
拿到血液标本后,首先我要做的是尽快分离PBMC(一般2h内),国产的分离液里天津灏洋的比较好,然后用冻存液冻存PBMC。PBMC的冻存过程比一般的细胞株要更为严格,最好用冻存器。ELISPOT试验的第一天,在包被抗体的同时,将细胞复苏,完全培养液培养过夜,第二天收集细胞并计数即可。
用Mabteck公司的ALP标记抗体吧,配合Millipore公司的Multiscreen-IP 96孔板,所有的试剂都可以减半,照样可以出非常好的结果,undefined96孔的试剂盒我一直做undefined96孔,但BCIP/NBT显色液没试过减半,因为它很便宜。记得当年第一次做实验就出了很好的结果,经过不断摸索,做出的蓝紫色斑点确实非常漂亮,几乎没有非特异斑点,嗯,ELISPOT是我最拿手的实验之一。
关于PBMC:
拿到血液标本后,首先我要做的是尽快分离PBMC(一般2h内),国产的分离液里天津灏洋的比较好,然后用冻存液冻存PBMC。PBMC的冻存过程比一般的细胞株要更为严格,最好用冻存器。ELISPOT试验的第一天,在包被抗体的同时,将细胞复苏,完全培养液培养过夜,第二天收集细胞并计数即可。